非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin’s lymphoma, NHL）是一種 B 細胞惡性血液腫瘤。目前，利用藥物（如 Ibrutinib）抑制 BTK ^[1] 激酶活性是治療 NHL 的重要方法。但是，由于抑制劑與 BTK 結合位點的突變，使得很多淋巴瘤病人對 Ibrutinib 的治療方案產(chǎn)生耐受，這就對尋找新的治療方案提出了迫切要求。

PROTAC（Proteolysis-targeting chimera）是新興的利用化合物降解靶向蛋白的方法 ^[2]。PROTAC 技術利用細胞內(nèi)天然存在的蛋白降解途徑-泛素化蛋白酶體途徑（Ubiquitin proteasome pathway）來清除需要被降解的特異蛋白。細胞內(nèi)結構或功能異常的蛋白通過一系列酶（泛素化酶 E1，E2，E3）的作用，被標記上多泛素化，隨之被轉(zhuǎn)移到蛋白酶體里進行降解 ^[3]。一個 PROTAC 分子包括兩個關鍵的結構域：與需要降解的靶蛋白特異結合的結構域、與 E3 泛素化連接酶結合的結構域，二者通過特定的連接子相連（如圖1）。PROTAC 分子通過上述兩個關鍵結構域?qū)⑿枰�降解的蛋白與 E3 泛素化連接酶連接起來，從而實現(xiàn)靶蛋白的多泛素化和蛋白酶體降解。

圖1. PROTAC 技術示意圖

近期，有兩組科學家都利用 PROTAC 技術研制出了可以靶向降解 BTK 激酶的化合物，他們的研究成果分別發(fā)表在國際 TOP 期刊 PANS ^[4]和 Cell Research ^[5]。他們設計的靶向降解 BTK 的 PROTAC 分子結構如圖 2 所示，該 PROTAC 由結合 BTK 的配體、連接子（linker）和結合 CRBN（cereblon，E3 連接酶的重要組分，介導 E3與底物結合）的配體構成。

圖2. PROTAC 靶向 BTK 分子示意圖

    Adelajda Zorba 團隊^[4]設計了擁有不同長度的連接子的靶向降解 BTK 的PROTACs 分子，并用 WesternBlot 檢測了細胞水平 PROTACs 對 BTK 的降解效率，結果發(fā)現(xiàn) PROTACs 分子在 1h 左右的時間即可開始對 BTK 有明顯的降解作用，且 BTK 的降解作用對 PROTACs 分子有明顯的劑量依賴作用（圖3）。

圖3. PROTACs分子降解BTK

此外，他們還研究了連接子的長度對于 PROTACs 分子與靶蛋白及 E3 連接酶結合形成三元絡合物的效率關系，發(fā)現(xiàn)在一定范圍內(nèi)，較長的連接子對于三元絡合物的形成更有利（圖4）。 

圖4. 不同 linker 長度對 BTK-PROTAC-E3 三元絡合物形成的影響

Yonghui Sun 團隊[5]設計的 BTK 特異的 PROTAC 分子不僅可以靶向降解野生型的 BTK 蛋白，同時也可以高效的降解對 Ibrutinib 耐受的突變型 BTK 蛋白（圖5），可以為 ibrutinib 耐受的 NHL 病人提供新的治療思路。

圖5. PROTAC 在多種細胞系中降解 BTK [5]

   PROTAC 利用細胞自身的蛋白質(zhì)降解機制-泛素化蛋白酶體途徑來靶向降解特定的蛋白，除了上述兩組科學家發(fā)表的成果，目前還在諸多其他蛋白（如BET、ER、AR等）的降解中取得了進展。此外，PROTAC 技術可以很好地解決很多不可成藥（undruggable）的靶點如轉(zhuǎn)錄因子等的靶向降解問題，在以后的靶向治療中將會發(fā)揮重要作用。

參考文獻

[1]  Davis, R. E. et al. Chronic Active B-cell-receptor Signalling in Diffuse Large B-cell Lymphoma. Nature 463, 88–92 (2010).

[2] Carmony KC, Kim KB.PROTAC-Induced Proteolytic Targeting

Methods MolBiol. 2012;832:627-38.

[3] RoetenMSF,et al. Positioning of proteasome inhibitors in therapy of solid malignancies.Cancer ChemotherPharmacol. 2018 Feb;81(2):227-243. 

[4]  Zorba A, et al.Delineating the role of cooperativity in the design of potent PROTACs for BTK.Proc Natl Acad Sci U S A. 2018Jul 31;115(31):E7285-E7292.

[5]  Sun Y, et al.PROTAC-induced BTK degradation as a novel therapy for mutated BTK C481S induced ibrutinib-resistant B-cell malignancies.

Cell Res. 2018Jul;28(7):779-781.

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一種有效的選擇性 Bruton's 酪氨酸激酶 (Btk) 抑制劑。Ibrutinib：選擇性，不可逆的 Btk 抑制劑，IC₅₀ 值為 0.5 nM。