注   意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
 
測(cè)定意義：肌酐是在肌肉中從磷酸肌酸通過自發(fā)和不可逆轉(zhuǎn)化而形成的，除非肌肉質(zhì)量有大的變化，通常情況所形成的肌酐量是相當(dāng)恒定的。游離肌酐的循環(huán)量完全依賴于它的排泄速度，從而測(cè)定尿液，血清或血漿中的肌酐量，可用于腎功能檢查。肌酐含量的增高常見于:慢性腎衰竭時(shí)排泄量的減少及肢端肥大癥。
 
測(cè)定原理：肌酐與過量苦味酸在堿性條件下反應(yīng)生成橙紅色苦味酸肌酐。在波長(zhǎng)490nm處有最大吸收峰，在一定的時(shí)間內(nèi)測(cè)定該復(fù)合物，即可計(jì)算出樣本中肌酐的含量，并可避免干擾。
 
肌酐+堿性苦味酸————肌酐苦味酸復(fù)合物
 
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、普通離心機(jī)，超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
 
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存，臨用前過濾。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：10x 標(biāo)準(zhǔn)液×1 瓶，4℃保存，臨用前，蒸餾水10倍稀釋1x標(biāo)準(zhǔn)液，終濃度為0.1 mg/ml。
*工作液配置：試劑二：試劑一 = 1：10（臨用前配置，用多少配多少）。
 
樣本收集：
1.血清，血漿，血清或血漿中的肌酐在 2-8℃下可保存 24 小時(shí)。
2.尿液:試驗(yàn)前將新鮮尿液用蒸餾水作1/50稀釋，測(cè)定結(jié)果乘以50。
 
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到490nm，蒸餾水調(diào)零。
2，按下表添加樣本試劑，充分混勻，置37℃水浴30秒鐘后，選擇波長(zhǎng)490nm，以空白管校零讀取起始吸光度(A1)，90秒鐘后讀取終末吸光度(A2)
備注:可根據(jù)使用儀器的不同，恒比例改變?cè)噭┡c樣本的量。
注意：空白管只需要做一次
 

試劑名稱（μL）	樣本管	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管
樣本	100
試劑三 1X			100
蒸餾水		100
工作液	1000	1000	1000

注意事項(xiàng)：
1、本方法的最低檢出濃度為0.03 g/L(取樣體積為0.1 mL)、線性范圍為O~l.0g/L r = O.9995, 精密度：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.38%~2.2%(濃度為0.2~1.0g/L.n =6), 準(zhǔn)確度：尿樣加標(biāo)平均回收率為93% ~105% (肌酐濃度為0.35~0.57g/Ln = 6)。本法測(cè)定中的最小取樣量為50uL。
2、尿樣中含有0.1mg/L的鎳、汞、硒、釩，0.2mg/L的鉻，0.3mg/L的殺蟲脒，0.4mg/L的鎘、對(duì)硝基酚，0.6mgL的鉛、砷，1mg/L的馬尿酸及甲基馬尿酸，16mg/L的2-硫代噻唑烷-4-羧酸，2mg/L的氟，3mg/L的酚，100mg/L的三氯乙酸，400mg/的扁桃酸，1000mg/L 的苯乙醛酸，不干擾測(cè)定。
3、反應(yīng)溫度、苦味酸純度及其濃度、氫氧化鈉濃度均對(duì)測(cè)定值有影響。反應(yīng)溫度必須控制在30℃以下。加水至10mL混勻后應(yīng)盡快完成標(biāo)準(zhǔn)和樣品的測(cè)定，從最先開始測(cè)定至最后一個(gè)樣品結(jié)束，整個(gè)比色過程必須控制在30min內(nèi)完成。
4、血紅蛋白(0.1mg/L)，膽紅素(10mg/dL)，前體及蛋白質(zhì)均不干擾反應(yīng)，但高濃度的還原物質(zhì)會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。
5、本產(chǎn)品在島津-UV1601PC 型儀器上通過第三方檢測(cè)，用于其他儀器需進(jìn)行驗(yàn)證。
6、中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 尿中肌酐分光光度測(cè)定方法
（Urine-Determination of creatinine -Spectrophotometric method）
WS/T 9 7 - 1 9 9 6

參考文獻(xiàn)：
1.Fabiny DLetal.ClinChem1971:17:696
2.Young DS,etal.ClinChem1975:21:286-288