微管蛋白是一種在維持細胞結構和促進細胞分裂中起著關鍵作用的蛋白質。抑制微管蛋白聚合已被證明是抑制癌細胞增殖的有效策略。在以往的研究中，識別能夠抑制微管蛋白聚合的化合物需要利用純化的微管蛋白或固定細胞的免疫熒光分析進行體外實驗。 
  2023年1月29日，美國Harutyun Khachatryan研究團隊在Biomolecules雜志發(fā)表了文章Identifification of Inhibitors of Tubulin Polymerization Using a CRISPR-Edited Cell Line with Endogenous Fluorescent Tagging of β-Tubulin and Histone H1，提出了一種新的方法來識別微管蛋白聚合抑制劑，利用內源性熒光標記β-微管蛋白和組蛋白H1的CRISPR - Hela細胞系來鑒定微管蛋白聚合抑制劑。該方法有助于研究活細胞內源性蛋白，而不使用細胞固定、免疫染色或重組蛋白過表達。

本研究使用β-微管蛋白（mCTover3）、組蛋白H1（mTagBFP2）和p62-SQSTM1（mRuby3）熒光蛋白， 用CRISPR和FAST-HDR載體系統(tǒng)開發(fā)HeLa細胞，采用Hana單細胞分離儀（Namocell）進行單細胞分選，使用綠色熒光通道，并分選到96孔板中進行單細胞克隆培養(yǎng)，然后選擇一個具有均勻明亮β-微管蛋白熒光的細胞克隆大量擴增得到實驗細胞。
  后續(xù)實驗通過高內涵成像分析來動態(tài)觀察微管蛋白聚合情況。用已知的微管蛋白聚合抑制劑、秋水仙堿和長春新堿處理此細胞，并證實了由此產生的微管蛋白聚合抑制的表型變化。此外，作者篩選了429個激酶抑制劑文庫，鑒定出三種抑制微管蛋白聚合的化合物（ON-01910、HMN-214和KX2-391）。
 
值得注意的是，研究中采用Namocell 單細胞分離儀幫助作者快速、輕柔、高效地獲得活性高的CRISPR - Hela單細胞，利于單克隆培養(yǎng)及擴增，為后續(xù)更多實驗提供足夠的細胞工具。
  
Namocell單細胞分離儀
  

• 輕 柔 - 壓力小于2psi，保護細胞活性
• 快 速 - 分選快（1min），初始化快（2min），樣本切換快（1min）
• 精 準 - 配備2-11色熒光通道，精準捕獲目的細胞
• 無 菌 - 一次性無菌芯片，隔絕樣本污染
• 輕 松 - 無需調校，開機即用
• 輕 巧 - 體積小巧，方便搬動

 
  Namocell 是一家成立于美國硅谷的專注于世界領先的單細胞分選技術的生物儀器公司，2022年7月加入Bio-Techne。公司自主研發(fā)的微流控單細胞分選平臺，使復雜的單細胞分選變得極其簡單快速，極大地推動了單細胞分析在基礎研究和臨床上的應用。我們的單細胞分選儀已在細胞株的構建，單克隆抗體的篩選，細胞基因編輯，基因及細胞治療，癌癥液體活檢，癌癥免疫治療，產前基因篩查，噬菌體展示，單細胞基因組學等多方面得到廣泛的應用。目前Namocell微流控單細胞分選儀已經被世界各大頂尖研究機構及生物制藥公司廣泛應用于生命科學研究的各個領域，例如美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)，美國食品藥品監(jiān)督管理局 (FDA)，美國疾病控制與預防中心(CDC)，哈佛大學，斯坦福大學，麻省理工大學，Genentech，Merck，Biogen，BMS，Janssen，Boehringer-Ingelheim等。
 






  
原文鏈接：https://www.mdpi.com/2218-273X/13/2/249