一、實驗介紹

懸尾實驗（Tail suspension test, TST）是一種經(jīng)典而又能快速評價抗抑郁藥物、興奮藥物、鎮(zhèn)靜藥物藥效的方法。該動物模型將實驗動物的尾部進行固定，使其頭部向下懸掛，動物在該環(huán)境中掙扎，企圖擺脫該困境，在經(jīng)過努力仍無法擺脫后，出現(xiàn)間斷性不動，顯示“行為絕望”狀態(tài)。實驗動物在該環(huán)境中拼命掙扎試圖逃跑又無法逃脫，從而提供了一個無可回避的壓迫環(huán)境，一段時間的實驗后，記錄處于該環(huán)境的動物產(chǎn)生絕望的不動狀態(tài)過程中的一系列參數(shù)，動物的表現(xiàn)出的這種典型的“不動狀態(tài)”，反映了一種被稱之為“行為絕望狀態(tài)”，這種行為絕望模型與抑郁癥類似，而且對絕大多數(shù)抗抑郁藥物敏感，而且其藥效與臨床藥效顯著相關，所以被廣泛用于抗抑郁藥物的初選。

二、實驗工具

懸尾裝置，醫(yī)用膠帶，攝像跟蹤系統(tǒng)以及分析軟件。推薦使用塑料懸尾實驗箱，尺寸通常為55cm高* 60cm*寬* 11.5cm深。為了防止動物之間的觀察或相互作用，實驗箱中間有一個擋板實驗動物隔開。同時保證每只動物的隔間足夠?qū)挸�，讓動物碰不到懸尾箱的箱壁。每個隔間的尺寸建議不低于:55cm高* 15cm*寬* 11.5cm深這個尺寸。小鼠的鼻子和實驗室箱子的地板之間的大致距離建議為20-25厘米。分析軟件推薦使用VisuTrack動物行為分析軟件，軟件可任意截取視頻，準確性高。懸尾實驗與曠場實驗等測試不同，不應該跟蹤動物的質(zhì)心/重心。VisuTrack動物行為分析軟件(上海欣軟)通過調(diào)查小鼠四肢的真實動作，實時分析小鼠搖擺(絕望狀態(tài))、掙扎行為等指標，自動存儲原始實驗視頻并可進行分析，減少了人為誤差。

三、測試方法

1) 將已在動物房適應了三天的動物從SPF動物房中拉入實驗室。SPF級動物房應設置的參數(shù)為室溫（22±2℃），濕度（40±20℃）%，12 h 晝夜交替燈光使動物有正常晝夜節(jié)律，實驗動物在此環(huán)境可自由攝取食物和水。

2) 將動物輕柔地從籠中拿出來，以最快的速度將其尾巴固定好，不得給小鼠造成多余的壓力和應激狀態(tài)。具體操作為用醫(yī)用膠帶粘在距離尾巴尖端 1 cm，以便將動物的尾巴從裝置懸掛桿上懸吊下來。動物尾巴尖端與地面之間的高度約為 30 cm，使小鼠呈頭倒式位。

3) 攝像鏡頭需提前調(diào)好，將其調(diào)到水平對準小鼠身體的位置，以便錄像可呈現(xiàn)完全的視野。

4) 實驗總共需錄視頻 6 min，錄像記錄動物實驗期間的行為，但記錄后4min動物的不動時間。

5) 記錄時長完成后，撕去醫(yī)用膠布將實驗動物小心取下來，并放回原籠中做好記錄。

6) 所有動物測試完成后，及時清理儀器中的糞便和尿液。

四、主要的指標及行為學意義

1) 肢體不動：當動物停止掙扎時,身體保持垂直倒懸狀態(tài),靜止不動，這個指標可視為實驗動物出現(xiàn)習得性無助后放棄掙扎的行為表現(xiàn)。動物在懸尾實驗中的不動時間越長，表明動物的抑郁程度越重。

2) 掙扎行為：當動物出現(xiàn)企圖掙扎、起身時的行為，動物的掙扎時間越短，表明動物的抑郁程度就更重。

記錄實驗動物的掙扎行為和不動時間，一般換算為以秒為單位的計量。通過與對照組進行對比，一般使用T檢驗即可，至于是否選擇配對或未配對則需要跟自己的實驗目的來選擇，此處不展開說明。

五、實驗注意事項

（測試時長、是否可重復、大小鼠的差異、品系）

1.膠帶要纏在接近動物尾巴尖端的地方，不要纏在靠近尾巴根部的地方，這樣會影響動物的活動。若太靠下動物的掙扎與活動會受到限制，影響實驗結(jié)果。

2.背景板要與動物的顏色形成強烈反差，以便軟件識別。例如用白色小鼠時，需要選用黑色的背景板，以便視頻錄制清晰，易分辨；反之亦然，用黑色的c57小鼠進行實驗時，則需要考慮用白色的背景板來完成襯托和凸顯。

3.不同品種的小鼠懸尾實驗表現(xiàn)不同：例如空白對照組c57小鼠不動時間較長,均值多大于100s; 空白對照組的ICR 小鼠不動時間均值多小于100 s; 抑郁行為判斷標準:不動時間與對照組相比有顯著性增加(P < 0. 05)即可，并不需要單純比較不動時長。

4.懸尾實驗并不建議用較重的大鼠，因為大鼠只能通過它們的尾巴來支持它們的體重，這對大鼠來說是痛苦的。同樣的道理，應該注意避免使用異常重的小鼠（例如用于模擬肥胖的小鼠），在這種情況下，實驗者應該尋找替代性的測試，例如強迫游泳實驗。

5.動物從飼養(yǎng)環(huán)境帶入實驗環(huán)境應適應一段時間，通常至少一個小時以上。

6.實驗環(huán)境應保持安靜，突然大或者一直持續(xù)的噪音會使實驗動物驚慌失措。

7.小鼠懸尾實驗持續(xù)時間通常為6分鐘。與強迫游泳實驗不同，小鼠在實驗初期更容易表現(xiàn)出不動。

8. 底部建議放置一個可拆卸的拖盤，收集糞便或尿液。

9. 懸掛后動物鼻尖與設備地板之前的參考距離在 20~25 cm 左右。

10.短時間不建議將此實驗重復第二遍，以免對實驗動物的心理狀態(tài)產(chǎn)生影響。

11.測試中，前肢只有小鼠運動，后肢不動，可視為動物的絕望狀態(tài)。

12.由于運動的慣性，小鼠的鐘擺式活動也需要視為動物的絕望狀態(tài)。

13.懸尾與強迫游泳實驗相比，該實驗沒有因浸泡在水中而導致體溫降低的風險。這兩個實驗在靈敏度和性能上有各種重要的差異，一個實驗的結(jié)果可能無法在另一個實驗中重復，故應理性看待實驗結(jié)果。

14.懸掛用的膠帶應牢固地粘貼在小鼠尾部和懸掛桿上，并且足夠堅固以承受正在測試的小鼠的重量。但是，膠帶不應該過于粘滯應保證既可以順利固定動物，又不至于在實驗結(jié)束后難以從實驗動物尾部移除，膠帶尺寸可盡量統(tǒng)一。

15.實驗結(jié)束后（通常是 6 分鐘），將動物放回鼠籠，應輕輕將膠帶從尾巴上拉下來，不要從尾巴上撕扯膠帶，避免給動物帶來痛苦。

16.清潔用品，每次實驗完成，收集糞便和尿液，徹底擦拭懸掛盒等儀器設備。

17.在實驗前幾天和后幾天推薦測試動物的行動能力，如自發(fā)活動等。目的是為了排除動物自身運動能力的影響，而更加說明是動物的抑郁程度不同而產(chǎn)生不動或掙扎樣行為。

18.本實驗在短期內(nèi)不建議重復，若必須重復一般建議兩次實驗間隔半個月以上。

19.若是多只動物同一時間段做實驗，則需要注意每只動物的間隔，以及動物與動物之間需要用不透明的擋板隔開，防止出現(xiàn)干擾。

六、實驗心得和經(jīng)驗

懸尾實驗步驟簡單，時間短，在一段時間內(nèi)出數(shù)據(jù)的效率很高。比起強迫游泳，關于溫度沒有什么太需要注意的地方，但一定要注重動物福利的落實和準確識別不動狀態(tài)，做到識準、記準。

七、小結(jié)

懸尾試驗非常適合測量引起急性抑郁癥。各種類型的抗抑郁藥物，例如三環(huán)類藥物、選擇性血清素再攝取抑制劑 (SSRI) 和單胺氧化酶抑制劑 (MAOI)、精神興奮劑、精神安定藥、抗焦慮藥等，都已使用懸尾試驗進行了測試，該模型和強迫游泳模型一樣可靠，在抑郁等藥物評價體系中占有不可替代的位置。