抗體(antibody):機體在抗原物質(zhì)刺激下,由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白?乖碳C體產(chǎn)生抗體?乖赡苁且环N蛋白質(zhì),但是抗體一定是一種蛋白質(zhì)。
1、普通抗體
普通抗體一般指不帶標(biāo)記的單克隆或者多克隆抗體,反應(yīng)性和應(yīng)用一般較廣,能做多個種屬的多種實驗應(yīng)用,最后實驗結(jié)果的觀察需要依賴酶催化底物顯色或者發(fā)出熒光后檢測,或者FITC、CY3等熒光標(biāo)記的二抗發(fā)出熒光檢測。
2、免疫熒光抗體
免疫熒光抗體是經(jīng)過免疫熒光實驗驗證的單克隆或者多克隆抗體,抗體通常情況下一般不帶標(biāo)記,通過FITC、CY3等熒光標(biāo)記二抗顯色,結(jié)果通過熒光顯微鏡觀察。
3、免疫組化抗體
免疫組化抗體是經(jīng)過免疫組化實驗驗證的單克隆或者多克隆抗體,抗體通常情況下一般不帶標(biāo)記,通過酶標(biāo)二抗催化底物顯色,結(jié)果通過普通光學(xué)顯微鏡觀察。
4、熒光標(biāo)記抗體
熒光標(biāo)記抗體一般指的是帶FITC、CY3等熒光標(biāo)記的二抗,用于免疫熒光實驗中識別對應(yīng)的一抗,或者FITC、CY3標(biāo)記的熒光一抗,可用于流式或免疫熒光實驗,只有經(jīng)過流式驗證的熒光抗體才能稱為流式抗體。
1、流式抗體
流式抗體是經(jīng)過流式實驗驗證的,一般是針對單一種屬的直接帶熒光標(biāo)記的單克隆抗體,檢測的是單細(xì)胞懸液,結(jié)果通過流式細(xì)胞儀分析。
6、封閉抗體
封閉抗體是流式實驗中用于特異性封閉細(xì)胞表面Fc受體的,不帶熒光標(biāo)記的純抗,如檢測小鼠的細(xì)胞樣本,封閉抗體為Purified Anti-Mouse CD16/32 Monoclonal Antibody。封閉抗體的作用是減少流式抗體染色過程中的非特異性染色,如果需檢測的是某些表面表達(dá)FC受體較豐富的細(xì)胞,如巨噬細(xì)胞,染色前必須使用封閉抗體。
7、WB抗體
流式抗體是經(jīng)過流式實驗驗證的,一般是針對單一種屬的直接帶熒光標(biāo)記的單克隆抗體,檢測的是單細(xì)胞懸液,結(jié)果通過流式細(xì)胞儀分析。
WB抗體是經(jīng)過WB實驗驗證的單克隆或者多克隆抗體,抗體上面一般不帶標(biāo)記,通常情況下是通過HRP酶標(biāo)二抗催化底物ECL發(fā)出熒光,通過曝光后顯出條帶。
8、二抗
二抗一般不能直接識別到抗原,需要通過結(jié)合能識別目標(biāo)蛋白的一抗間接偶聯(lián)到目標(biāo)蛋白上。針對不同的實驗應(yīng)用類型,二抗上面可以選擇不同的標(biāo)記,如做WB和IHC實驗,通常情況下選擇帶HRP酶的二抗,做IF實驗,一般選擇帶FITC、CY3等熒光基團的二抗,也有些二抗標(biāo)記biotin,biotin自身并不帶熒光集團,也不能催化底物顯色或者發(fā)出熒光,因此選擇biotin標(biāo)記的二抗,還需要選擇HRP酶或者熒光標(biāo)記的鏈霉親和素偶聯(lián)到生物素上,進(jìn)一步反應(yīng)才能檢測到目標(biāo)蛋白。