當(dāng)免疫組化染色實(shí)驗(yàn)操作到了顯色操作環(huán)節(jié)，說(shuō)明之前環(huán)節(jié)的工作開(kāi)展都比較順暢，也因此我們就更不能在染色顯色操作環(huán)節(jié)出現(xiàn)任何失誤，否則可能前功盡棄；同時(shí)，顯色液的污染還存在較大的健康安全隱患。本期就和大家一起交流染色顯色液配置及相關(guān)注意事項(xiàng)。
 

• 在配置顯色液之前，必須應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的配置順序操作，一般的配制順序是先加蒸餾水，然后加緩沖液，接著是底物H2O2，最后才添加 DAB 顯色劑。

• 記得要校正蒸餾水pH濃度(pH=7.0)，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。若出現(xiàn)沉淀，要先進(jìn)行過(guò)濾操作后才能使用。

• 同時(shí)注意現(xiàn)用現(xiàn)配，現(xiàn)配現(xiàn)用。配制好的溶液要避光存放，20 min內(nèi)有效。另外配制順序錯(cuò)誤也會(huì)影響顯色效果。

• 在做染色操作前，充分觀察常規(guī)切片和HE染色情況，盡可能找出陽(yáng)性內(nèi)對(duì)照部位。顯色時(shí)，一定要在顯微鏡下控制染色的深淺，以內(nèi)對(duì)照部位出現(xiàn)稍濃于目的色的時(shí)間為該片的顯色時(shí)間。

• 如果無(wú)陽(yáng)性對(duì)照，可選擇切片內(nèi)的紅細(xì)胞(RBC)為片內(nèi)對(duì)照，一般紅細(xì)胞（RBC）略微變色即可。

• 因?yàn)椴煌�的抗體、組織、氣溫、水質(zhì)等因素都會(huì)對(duì)顯色帶來(lái)影響，所以顯色時(shí)間的控制尤為重要，同時(shí)具備陽(yáng)性對(duì)照最好。

• 顯色時(shí)間可控制在5~15min。如果實(shí)驗(yàn)室室溫較高，時(shí)間需要縮短；室溫較低，則需要延長(zhǎng)，但注意不能超過(guò)15min，不然容易導(dǎo)致背景上色。

DAB顯色劑具有致癌隱患，這個(gè)問(wèn)題必須重視，避免污染技術(shù)人員、其他人員、科室和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。

• 工具專用

因?yàn)镈AB顯色劑會(huì)污染，具有致癌隱患，所以配制過(guò)程中要注意污染隱患。但為了切實(shí)切斷污染源頭，顯色操作所使用的器皿和顯微鏡要作為專用設(shè)備工具。在觀察時(shí)DAB難免污染顯微鏡，特別是滴染顯色常帶著顯色液觀察，如不專用極易對(duì)他人造成污染，并且每次使用完畢的器皿和顯微鏡要擦洗干凈和復(fù)位。

• 盡量避免顯色液滴落

鏡下控制顯色程度時(shí)，盡量不要把顯色液滴到臺(tái)面及顯微鏡上，也不要濺到衣物和皮膚上。

• 同一地點(diǎn)操作

從顯色液的配制到顯色操作實(shí)驗(yàn)結(jié)束，整個(gè)操作過(guò)程均應(yīng)在固定的環(huán)境和地點(diǎn)進(jìn)行，如同一操作桌面上進(jìn)行，這樣可以使DAB顯色劑的污染面積降到最小，清洗也容易，也不會(huì)有外滴風(fēng)險(xiǎn)。

• 實(shí)驗(yàn)廢屑的處理

在顯色操作過(guò)程中難免會(huì)有廢屑產(chǎn)生，像一些擦拭紙等廢棄物，需要定期用硫酸液中和處理后再集中丟棄處理，這也是為了避免污染他人。

【參考文獻(xiàn)】

病理技術(shù)大講堂1001問(wèn)-病理技術(shù)操作疑難點(diǎn)解惑答疑. 席越，陳軍主編.人民衛(wèi)生出版社