三種常用化學(xué)消毒劑對(duì)諾卡菌屬的消毒效果實(shí)驗(yàn)對(duì)比
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>通過(guò)常用化學(xué)消毒劑對(duì)諾卡菌屬的消毒效果，為諾卡菌屬的消毒策略提供依據(jù)。
實(shí)驗(yàn)方法： 以鼻疽諾卡菌為指示菌，分別選取高效消毒劑（含氯類）、中效消毒劑（醇類）、中低效消毒劑（季銨鹽類）進(jìn)行載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)，并以染有定量鼻疽諾卡菌的不銹鋼臺(tái)面為對(duì)象進(jìn)行物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。結(jié)果 載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果表明，60%乙醇作用2min、有效氯500mg/L 含氯消毒劑作用 5min、1000mg/L季銨鹽作用10min均可完全殺滅鼻疽諾卡菌物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中，75%乙醇作用5min，有效氯1000mg/L含氯消毒劑作用 10 min 均對(duì)鼻疽諾卡菌有完全殺滅效果，而1900mg/L季銨鹽作用20min仍未能完全殺滅鼻疽諾卡菌。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論 ：針對(duì)諾卡菌屬選用常用化學(xué)消毒劑時(shí)，可初選醇類和含氯消毒劑；若選用季銨鹽類消毒劑，則需較高的濃度和較長(zhǎng)的作用時(shí)間。
具體實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 菌懸液的制備
參照2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》的方法，取鼻疽諾卡菌48 h新鮮培養(yǎng)物，用胰蛋白胨生理鹽水溶液(TPS)洗脫，加入有機(jī)干擾物牛血清白蛋白，菌懸液濃度為2.5×107～2.5×108 cfu/mL
2. 消毒劑選擇及配制
在實(shí)驗(yàn)室常用消毒劑中，分別選取高效消毒劑(84消毒液)、中效消毒劑。(75%乙醇)和中低效消毒劑(雙癸基二甲基溴化銨)。用無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)硬水配制成使用濃度。
3.中和劑鑒定試驗(yàn)
中和劑為D/E中和肉湯主要中和成分為0.1%硫乙醇酸鈉、0.6%硫代硫酸鈉、0.25%亞硫酸氫鈉、0.7%卵磷脂和0.5%吐溫80。按2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》)對(duì)上述消毒劑進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。
4.載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)
以不銹鋼圓片為載體，對(duì)鼻疽諾卡菌進(jìn)行載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)。
5.對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
根據(jù)各類消毒劑的特性分別設(shè)定3組作用時(shí)間，以該消毒劑的常用濃度為起始濃度，若全殺滅則降低濃度繼續(xù)試驗(yàn)，直至達(dá)到該消毒劑的min使用濃度，對(duì)照組回收菌量為5×105~5×106cfu/片，殺滅對(duì)數(shù)值≥3.00判定為消毒合格。
6.物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)
統(tǒng)一使用 500 mL噴壺，以染有定量鼻疽諾卡菌的不銹鋼試驗(yàn)臺(tái)面為對(duì)象，用各消毒劑的常用濃度進(jìn)行定量噴灑消毒。對(duì)照組回收菌量為5×105~5×106cfu/cm2,殺滅對(duì)數(shù)值≥3.00判定為消毒合格。
7.載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果
3組消毒劑以常用濃度75%乙醇作用1 min、有效氯1000 mg/L含氯消毒劑作用2 min、1900 mg/L 季銨鹽作用5 min均能完全殺滅鼻疽諾卡菌(表1)。3組消毒劑降低濃度，60%乙醇作用2 min、有效氯500 mg/L含氯消毒劑作用5 min、1000 mg/L,季銨鹽作用10 min均可完全殺滅鼻疽諾卡菌。
8.物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果
3組消毒劑以常用濃度作用，即75%乙醇作用5 min、1000 mg/L有效氯作用5 min可全殺滅諾卡菌；而1900 mg/L季銨鹽作用20 min仍未完全殺滅諾卡菌，但殺滅對(duì)數(shù)值達(dá)到4.45,可判為消毒合格(表3)。
常用化學(xué)消毒劑消毒機(jī)理：
諾卡菌屬細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)組成與革蘭陽(yáng)性菌相似，其主要成分為肽聚糖，N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁借助β-1，4糖苷鍵連接成鏈狀結(jié)構(gòu)，再由胞壁酸上的短肽側(cè)鏈進(jìn)一步交聯(lián)成為立體網(wǎng)格分子，增強(qiáng)細(xì)胞壁的保護(hù)效果 ，防止多種殺菌藥液滲入，理論上會(huì)導(dǎo)致對(duì)化學(xué)消毒劑的抵抗力較強(qiáng)，消毒難度增大。
乙醇廣泛用于皮膚黏膜以及醫(yī)療器械和精密儀器表面消毒，消毒機(jī)制是對(duì)微生物的脫水作用，以及蛋白質(zhì)變性、凝固，破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)功能，同時(shí)能夠破壞微生物酶系統(tǒng)，阻礙其正常代謝83。對(duì)于放線菌來(lái)說(shuō)，主要消毒方法的報(bào)道是土壤中物理 或農(nóng)藥的殺滅試驗(yàn)，關(guān)于乙醇對(duì)其消毒效果的觀察未見(jiàn)報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)中，75%的乙醇作用1 min對(duì)諾卡菌屬具有較好殺滅效果浸泡60%的乙醇消毒劑殺滅諾卡菌屬也僅需作用2min。這說(shuō)明較低濃度的乙醇仍然能有效殺滅諾卡菌屬，或?qū)σ掖紴橹饕獨(dú)⒕煞只驈?fù)配成分的消毒劑生產(chǎn)有指導(dǎo)意義。
含氯消毒劑溶于水能產(chǎn)生次氯酸，破壞微生物細(xì)胞壁，繼而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，氧化破壞細(xì)胞成分，使其代謝失調(diào)、停止。在酸性環(huán)境中含氯消毒劑溶解過(guò)程能產(chǎn)生更多的次氯酸，從而使其殺菌能力增強(qiáng)。同時(shí)，氯能與細(xì)胞中代謝相關(guān)的酶形成氮-氧化合物，使細(xì)胞產(chǎn)生代謝障礙而死亡。有研究發(fā)現(xiàn)，使用500mg/L 含氯消毒劑擦拭重癥醫(yī)學(xué)科物體表面，對(duì)多種耐藥菌和耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌有殺滅效果。
載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果顯示，500mg/L有效氯作用2、5、10min對(duì)鼻疽諾卡菌均有殺滅效果物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中，有效氯500mg/L含氯消毒劑作用5min、有效氯1000mg/L含氯消毒劑作用2min 即有殺滅效果，提示隨消毒劑內(nèi)有效氯濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)，殺滅效果也隨之提高。
季銨鹽類化合物是一類陽(yáng)離子表面活性劑，包括單鏈季銨鹽和雙鏈季銨鹽，其殺菌作用機(jī)制主要是帶正電荷的陽(yáng)離子通過(guò)異性電荷的吸引作用，在菌體表面濃集，再滲透擴(kuò)散穿透細(xì)胞壁使其被破壞，經(jīng)過(guò)被破壞的細(xì)胞膜人侵到細(xì)胞內(nèi)部，使蛋白質(zhì)變性沉淀，酶活性受到損害，加速細(xì)菌調(diào)亡季銨鹽是近些年在消毒領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的新型消毒劑，對(duì)細(xì)菌、真菌和親脂病毒均有良好的殺滅效果。
季銨鹽載體消毒濕巾對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌及泛耐藥銅綠假單胞菌均有較好的殺滅效果。
另外，季銨鹽類消毒劑有一定持效殺菌作用，單鏈季銨鹽、復(fù)合季銨鹽和固化季銨鹽，其殺菌持效性依次增強(qiáng)；同樣，雙鏈季銨鹽消毒劑在較低濃度下（850mg/L）對(duì)表面噴霧后存放4h后，對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌仍具有良好的持效殺滅作用；
雙鏈季銨鹽消毒液（含量0.3%±0.03%）對(duì)ICU物品表面的消毒適宜間隔時(shí)間為8h，研究結(jié)果表明季銨鹽具有持效殺菌作用。
在該實(shí)驗(yàn)中，載體定量殺菌濃度1000 mg/L季銨鹽，作用10min可全殺滅諾卡菌；物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中，1900mg/L季銨鹽才能達(dá)到殺滅效果，說(shuō)明日常消毒過(guò)程中可使用較高濃度的季銨鹽并延長(zhǎng)作用時(shí)間。
來(lái)源：蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
實(shí)驗(yàn)方法： 以鼻疽諾卡菌為指示菌，分別選取高效消毒劑（含氯類）、中效消毒劑（醇類）、中低效消毒劑（季銨鹽類）進(jìn)行載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)，并以染有定量鼻疽諾卡菌的不銹鋼臺(tái)面為對(duì)象進(jìn)行物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。結(jié)果 載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果表明，60%乙醇作用2min、有效氯500mg/L 含氯消毒劑作用 5min、1000mg/L季銨鹽作用10min均可完全殺滅鼻疽諾卡菌物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中，75%乙醇作用5min，有效氯1000mg/L含氯消毒劑作用 10 min 均對(duì)鼻疽諾卡菌有完全殺滅效果，而1900mg/L季銨鹽作用20min仍未能完全殺滅鼻疽諾卡菌。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論 ：針對(duì)諾卡菌屬選用常用化學(xué)消毒劑時(shí)，可初選醇類和含氯消毒劑；若選用季銨鹽類消毒劑，則需較高的濃度和較長(zhǎng)的作用時(shí)間。
具體實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 菌懸液的制備
參照2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》的方法，取鼻疽諾卡菌48 h新鮮培養(yǎng)物，用胰蛋白胨生理鹽水溶液(TPS)洗脫，加入有機(jī)干擾物牛血清白蛋白，菌懸液濃度為2.5×107～2.5×108 cfu/mL
2. 消毒劑選擇及配制
在實(shí)驗(yàn)室常用消毒劑中，分別選取高效消毒劑(84消毒液)、中效消毒劑。(75%乙醇)和中低效消毒劑(雙癸基二甲基溴化銨)。用無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)硬水配制成使用濃度。
3.中和劑鑒定試驗(yàn)
中和劑為D/E中和肉湯主要中和成分為0.1%硫乙醇酸鈉、0.6%硫代硫酸鈉、0.25%亞硫酸氫鈉、0.7%卵磷脂和0.5%吐溫80。按2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》)對(duì)上述消毒劑進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。
4.載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)
以不銹鋼圓片為載體，對(duì)鼻疽諾卡菌進(jìn)行載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)。
5.對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
根據(jù)各類消毒劑的特性分別設(shè)定3組作用時(shí)間，以該消毒劑的常用濃度為起始濃度，若全殺滅則降低濃度繼續(xù)試驗(yàn)，直至達(dá)到該消毒劑的min使用濃度，對(duì)照組回收菌量為5×105~5×106cfu/片，殺滅對(duì)數(shù)值≥3.00判定為消毒合格。
6.物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)
統(tǒng)一使用 500 mL噴壺，以染有定量鼻疽諾卡菌的不銹鋼試驗(yàn)臺(tái)面為對(duì)象，用各消毒劑的常用濃度進(jìn)行定量噴灑消毒。對(duì)照組回收菌量為5×105~5×106cfu/cm2,殺滅對(duì)數(shù)值≥3.00判定為消毒合格。
7.載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果
3組消毒劑以常用濃度75%乙醇作用1 min、有效氯1000 mg/L含氯消毒劑作用2 min、1900 mg/L 季銨鹽作用5 min均能完全殺滅鼻疽諾卡菌(表1)。3組消毒劑降低濃度，60%乙醇作用2 min、有效氯500 mg/L含氯消毒劑作用5 min、1000 mg/L,季銨鹽作用10 min均可完全殺滅鼻疽諾卡菌。
8.物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果
3組消毒劑以常用濃度作用，即75%乙醇作用5 min、1000 mg/L有效氯作用5 min可全殺滅諾卡菌；而1900 mg/L季銨鹽作用20 min仍未完全殺滅諾卡菌，但殺滅對(duì)數(shù)值達(dá)到4.45,可判為消毒合格(表3)。
常用化學(xué)消毒劑消毒機(jī)理：
諾卡菌屬細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)組成與革蘭陽(yáng)性菌相似，其主要成分為肽聚糖，N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁借助β-1，4糖苷鍵連接成鏈狀結(jié)構(gòu)，再由胞壁酸上的短肽側(cè)鏈進(jìn)一步交聯(lián)成為立體網(wǎng)格分子，增強(qiáng)細(xì)胞壁的保護(hù)效果 ，防止多種殺菌藥液滲入，理論上會(huì)導(dǎo)致對(duì)化學(xué)消毒劑的抵抗力較強(qiáng)，消毒難度增大。
乙醇廣泛用于皮膚黏膜以及醫(yī)療器械和精密儀器表面消毒，消毒機(jī)制是對(duì)微生物的脫水作用，以及蛋白質(zhì)變性、凝固，破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)功能，同時(shí)能夠破壞微生物酶系統(tǒng)，阻礙其正常代謝83。對(duì)于放線菌來(lái)說(shuō)，主要消毒方法的報(bào)道是土壤中物理 或農(nóng)藥的殺滅試驗(yàn)，關(guān)于乙醇對(duì)其消毒效果的觀察未見(jiàn)報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)中，75%的乙醇作用1 min對(duì)諾卡菌屬具有較好殺滅效果浸泡60%的乙醇消毒劑殺滅諾卡菌屬也僅需作用2min。這說(shuō)明較低濃度的乙醇仍然能有效殺滅諾卡菌屬，或?qū)σ掖紴橹饕獨(dú)⒕煞只驈?fù)配成分的消毒劑生產(chǎn)有指導(dǎo)意義。
含氯消毒劑溶于水能產(chǎn)生次氯酸，破壞微生物細(xì)胞壁，繼而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，氧化破壞細(xì)胞成分，使其代謝失調(diào)、停止。在酸性環(huán)境中含氯消毒劑溶解過(guò)程能產(chǎn)生更多的次氯酸，從而使其殺菌能力增強(qiáng)。同時(shí)，氯能與細(xì)胞中代謝相關(guān)的酶形成氮-氧化合物，使細(xì)胞產(chǎn)生代謝障礙而死亡。有研究發(fā)現(xiàn)，使用500mg/L 含氯消毒劑擦拭重癥醫(yī)學(xué)科物體表面，對(duì)多種耐藥菌和耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌有殺滅效果。
載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果顯示，500mg/L有效氯作用2、5、10min對(duì)鼻疽諾卡菌均有殺滅效果物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中，有效氯500mg/L含氯消毒劑作用5min、有效氯1000mg/L含氯消毒劑作用2min 即有殺滅效果，提示隨消毒劑內(nèi)有效氯濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)，殺滅效果也隨之提高。
季銨鹽類化合物是一類陽(yáng)離子表面活性劑，包括單鏈季銨鹽和雙鏈季銨鹽，其殺菌作用機(jī)制主要是帶正電荷的陽(yáng)離子通過(guò)異性電荷的吸引作用，在菌體表面濃集，再滲透擴(kuò)散穿透細(xì)胞壁使其被破壞，經(jīng)過(guò)被破壞的細(xì)胞膜人侵到細(xì)胞內(nèi)部，使蛋白質(zhì)變性沉淀，酶活性受到損害，加速細(xì)菌調(diào)亡季銨鹽是近些年在消毒領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的新型消毒劑，對(duì)細(xì)菌、真菌和親脂病毒均有良好的殺滅效果。
季銨鹽載體消毒濕巾對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌及泛耐藥銅綠假單胞菌均有較好的殺滅效果。
另外，季銨鹽類消毒劑有一定持效殺菌作用，單鏈季銨鹽、復(fù)合季銨鹽和固化季銨鹽，其殺菌持效性依次增強(qiáng)；同樣，雙鏈季銨鹽消毒劑在較低濃度下（850mg/L）對(duì)表面噴霧后存放4h后，對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌仍具有良好的持效殺滅作用；
雙鏈季銨鹽消毒液（含量0.3%±0.03%）對(duì)ICU物品表面的消毒適宜間隔時(shí)間為8h，研究結(jié)果表明季銨鹽具有持效殺菌作用。
在該實(shí)驗(yàn)中，載體定量殺菌濃度1000 mg/L季銨鹽，作用10min可全殺滅諾卡菌；物體表面消毒模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)中，1900mg/L季銨鹽才能達(dá)到殺滅效果，說(shuō)明日常消毒過(guò)程中可使用較高濃度的季銨鹽并延長(zhǎng)作用時(shí)間。
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