在從事CAR-T細(xì)胞治療研發(fā)的路上，小賽也在打磨自己的「醫(yī)藥養(yǎng)成筆記」，把遇到過(guò)的問(wèn)題都認(rèn)真整理出來(lái)，同時(shí)，小賽也準(zhǔn)備了「細(xì)胞治療完整解決方案」，包括了CAR分子的設(shè)計(jì)、慢病毒包裝、CAR-T細(xì)胞構(gòu)建、體外體內(nèi)殺傷驗(yàn)證等多個(gè)重要環(huán)節(jié)，致力于為廣大研發(fā)人員的項(xiàng)目出謀劃策。掃碼即可免費(fèi)領(lǐng)取電子版，快來(lái)一鍵獲取干貨吧！
 

「醫(yī)藥養(yǎng)成筆記」精選放送

——part1：「靶細(xì)胞的構(gòu)建」相關(guān)問(wèn)題
 

Q1：選定適應(yīng)癥和靶點(diǎn)，卻缺乏合適的天然腫瘤細(xì)胞作為靶細(xì)胞，這種情況應(yīng)該怎么選擇靶細(xì)胞？
這種情況下可以選擇構(gòu)建相應(yīng)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，細(xì)胞株種類的選擇上還是盡量和所研究的適應(yīng)癥一致，例如研究的適應(yīng)癥為肝癌，就可以選擇相應(yīng)的肝癌腫瘤細(xì)胞系來(lái)進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建，這樣構(gòu)建的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞也可以用于下游的體內(nèi)抗腫瘤活性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)。另外，如果僅做一些簡(jiǎn)單的抗腫瘤活性評(píng)估和特異性驗(yàn)證工作，也可以選擇293T和CHO-K1這一類比較常用的工具細(xì)胞，這類細(xì)胞易于被慢病毒感染，因此很容易獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，可以節(jié)省時(shí)間成本。

Q2：進(jìn)行雙特異性CAR-T的相關(guān)研究，但缺少雙靶點(diǎn)共表達(dá)的細(xì)胞系，如何解決靶細(xì)胞的選擇問(wèn)題以及驗(yàn)證所構(gòu)建的CAR-T細(xì)胞的特異性問(wèn)題？
為解決腫瘤細(xì)胞靶點(diǎn)抗原表達(dá)的異質(zhì)性以及CAR-T細(xì)胞治療過(guò)程中存在抗原逃逸問(wèn)題，雙特異性CAR-T的研究也越來(lái)越多。在沒(méi)有適合的用于雙靶點(diǎn)CAR-T細(xì)胞研究的靶細(xì)胞的情況下，可以通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株來(lái)解決，用于構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的細(xì)胞需盡可能來(lái)源于所研究的適應(yīng)癥的腫瘤細(xì)胞。為研究雙特異性CAR-T細(xì)胞的功能，也可以構(gòu)建表達(dá)單抗原以及雙抗原的細(xì)胞株，這樣通過(guò)體外對(duì)這些細(xì)胞株的裂解作用，可以在一定程度上評(píng)估雙特異性CAR-T細(xì)胞的特異性。

Q3：如何解決穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株表面抗原丟失的問(wèn)題：用CD20編碼慢病毒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞構(gòu)建了一株293T-CD20穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，但是在培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)CD20的表達(dá)時(shí)高時(shí)低。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株如果帶有真核抗性的話可以加入相應(yīng)的抗生素來(lái)維持，但抗生素的加入量需要進(jìn)行優(yōu)化才能取得比較好的維持效果；如果不具有真核抗性，可以通過(guò)流式分選進(jìn)行幾輪富集，這樣可能能夠解決穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞抗原丟失的問(wèn)題；另外可以通過(guò)挑克隆的方式，篩選獲得抗原穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。

Q4：做CAR-T細(xì)胞治療腫瘤方面相關(guān)的研究時(shí)，如何選擇合適的靶細(xì)胞來(lái)證明CAR-T細(xì)胞抗腫瘤效果的特異性？
可以選擇靶抗原表達(dá)和不表達(dá)的細(xì)胞株，然后用CAR-T和對(duì)照T分別殺傷這兩種細(xì)胞，依據(jù)殺傷結(jié)果來(lái)判斷CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤效果是否具有特異性。

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