文章標(biāo)題：Integrated Proteomics and Metabolomics Analysis of Nitrogen System Regulation on Soybean Plant Nodulation and Nitrogen Fixation
發(fā)表期刊：INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES
發(fā)表時間：2022.2
影響因子：5.923
合作客戶：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院

百趣生物提供服務(wù)：蛋白質(zhì)組學(xué)分析和代謝組學(xué)分析

1、研究背景
大豆產(chǎn)量取決于根瘤固氮和氮施肥的綜合作用，而大豆根系暴露于高濃度氮條件下，可抑制根瘤生長，加速根瘤衰老，降低固氮的效率。氮影響豆科作物結(jié)瘤和固氮的具體機制尚不清楚。為研究大豆中氮、結(jié)瘤與固氮的關(guān)系，采用嫁接法制備了單側(cè)結(jié)瘤的雙根大豆植株。在第3個三葉(V3)至第4個三葉(V4)生長期(5天)，向非結(jié)瘤側(cè)添加氮營養(yǎng)液，在結(jié)瘤側(cè)添加無氮營養(yǎng)液。百趣解讀，本實驗旨在研究外源氮對大豆根瘤中蛋白質(zhì)和代謝物的影響，為分析大豆根瘤中施氮與固氮相互作用的生理機制。

2、研究結(jié)果
在V3期前，在大豆幼苗兩側(cè)加入氮素濃度為25mg/L(硝酸銨濃度為71.4mg/L)的營養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。從V3期到V4期(為期5天)，將幼苗分為有氮處理或無氮處理的兩組。氮處理組在未結(jié)瘤根中加入氮濃度為100mg/L(硝酸銨濃度為285.6mg/L)的營養(yǎng)液，在結(jié)瘤根中加入無氮營養(yǎng)液，記錄為NH。在無氮組的兩側(cè)加入無氮營養(yǎng)液，記錄為NF

氮供應(yīng)對結(jié)節(jié)生長和固氮酶活性的影響
百趣解讀，通過對不同處理NH和NF向未結(jié)瘤的側(cè)根供氮5天后，了解在結(jié)瘤的側(cè)根上的根瘤數(shù)量和重量，5天供氮對根瘤的生長發(fā)育無顯著影響(表1)。圖1顯示了氮供應(yīng)對雙根大豆根瘤中固氮酶活性的影響。向非結(jié)瘤側(cè)根供氮后，與NF處理相比，NH處理其結(jié)瘤側(cè)的特定固氮酶活性(SNA)和乙炔還原活性(ARA)分別降低了44.0%和41.0%，說明向非結(jié)瘤側(cè)根供氮5天對結(jié)瘤側(cè)根瘤的ARA和SNA有顯著影響。

表1. 雙根大豆根瘤數(shù)和干重的變化

圖1. 大豆雙根根瘤的固氮酶活性研究

大豆結(jié)節(jié)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析
通過分析了氮供應(yīng)處理和對照之間的蛋白質(zhì)組學(xué)變化，共鑒定出8573個蛋白，其中5279個蛋白屬于甘氨酸（大豆），3294個蛋白屬于日本慢生根瘤菌。按照治療組間的差異表達(dá)蛋白(DEPs)采用FC>1.2或FC<0.83，p值<0.05為標(biāo)準(zhǔn)，共鑒定出164個DEPs。

百趣解讀，利用GO數(shù)據(jù)庫進(jìn)行注釋，研究了上述DEPs的功能。根據(jù)功能特征，DEPs屬于與細(xì)胞組分(CC)、分子功能(MF)和生物過程(BP)相關(guān)的三組。CC組大豆根瘤組織的DEPs多富集于淀粉質(zhì)體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、內(nèi)膜系統(tǒng)、膜蛋白復(fù)合物等中。MF組中的DEPs主要富含糖原（淀粉）合酶活性、輔助因子結(jié)合、血紅素結(jié)合、四吡咯結(jié)合成分等。BP組主要富含淀粉生物合成過程、蛋白質(zhì)退出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、淀粉代謝過程等（圖2）。這些結(jié)果表明，氮處理可以調(diào)節(jié)大豆根瘤組織的碳代謝和氮代謝，從而影響大豆根瘤的固氮能力。

百趣生物解讀，CC組大豆根瘤菌的DEPs多富集于細(xì)胞質(zhì)、非膜結(jié)合細(xì)胞器、含蛋白復(fù)合物等中。MF組的DEPs主要富集于固氮酶活性、氧化還原酶活性等。BP組主要富集于固氮、氮循環(huán)代謝過程、有機氮化合物生物合成過程、細(xì)胞氮化合物代謝過程等（圖3）。結(jié)果表明大豆根瘤菌與根瘤組織的結(jié)果相同，根瘤菌中大部分差異蛋白在氮和碳代謝過程中富集。 
 

圖2. 大豆結(jié)節(jié)組織中差異表達(dá)蛋白（DEPs）的GO注釋統(tǒng)計
 

大豆結(jié)節(jié)的代謝組學(xué)分析
百趣解讀，通過分析氮供應(yīng)處理和對照之間的代謝組學(xué)方法測定大豆根瘤代謝譜的變化。治療組間的差異表達(dá)代謝物(DEMs)采用VIP>1，p值<0.05為標(biāo)準(zhǔn)，共鑒定出56種差異表達(dá)代謝物(DEMs)，其中上調(diào)20個，下調(diào)36個。利用代謝組學(xué)(KEGG)通路分析，探索富含差異代謝物的代謝組學(xué)代謝途徑。DEMs主要富集于代謝途徑、次生代謝產(chǎn)物的生物合成、氨基酸生物合成、磷酸戊糖途徑、碳代謝、半胱氨酸和蛋氨酸代謝、精氨酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代謝等方面。

3、結(jié)論
通過比較氮處理和不氮處理大豆，氮調(diào)控淀粉和蔗糖代謝、有機酸代謝、硫代謝、氮代謝、氨基酸代謝等代謝途徑。此外，外源氮促進(jìn)了根瘤中腐胺、一氧化氮和天冬酰胺的合成，抑制了蔗糖向蘋果酸的轉(zhuǎn)化；因此，根瘤菌缺乏固氮能量。此外，外源氮降低了根瘤細(xì)胞壁的合成，從而抑制了根瘤的生長和固氮。

文/阿趣代謝組學(xué)