細(xì)胞培養(yǎng)的介紹與基本流程
百趣代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)室分享：細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆術(shù)。是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定的營養(yǎng)條件等），使細(xì)胞生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。小趣剛剛接觸細(xì)胞的時(shí)候很慌，每天小心翼翼，生怕哪天它一不高興就給我“臉色”看。經(jīng)過多年摸爬滾打，小趣終于成長為一名合格的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)員，哈哈！今天，就和大家來聊一聊細(xì)胞培養(yǎng)的基本流程。
細(xì)胞培養(yǎng)主要涉及細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代、凍存3個(gè)基本流程。其次才是相關(guān)的代謝組學(xué)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞轉(zhuǎn)染、增殖、凋亡、周期、免疫熒光等等），要知道良好的細(xì)胞狀態(tài)才是做好實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。
01細(xì)胞復(fù)蘇
細(xì)胞從哪里來呢？一般細(xì)胞株的話從專業(yè)的細(xì)胞庫購買就可以。原代細(xì)胞需要從組織進(jìn)行分離，且原代細(xì)胞分離后傳代次數(shù)非常有限，僅僅幾代狀態(tài)就開始下滑。細(xì)胞復(fù)蘇之前的準(zhǔn)備工作至關(guān)重要。培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、槍頭進(jìn)行消毒、滅菌處理（小趣使用的是一款可以高溫滅菌的培養(yǎng)箱，輕松了很多）。針對細(xì)胞準(zhǔn)備特定的培養(yǎng)基以及高品質(zhì)的胎牛血清、雙抗；此外就是細(xì)胞的“家”了！大家一定注意可不能使用劣質(zhì)的培養(yǎng)皿/瓶，否則貼壁類的細(xì)胞不貼壁。細(xì)胞復(fù)蘇的基本流程已給大家梳理好了。
02細(xì)胞傳代
細(xì)胞復(fù)蘇工作完成后，就靜待細(xì)胞慢慢成長吧，細(xì)胞在生長的過程中會(huì)消耗營養(yǎng)，產(chǎn)生代謝物，培養(yǎng)液pH會(huì)發(fā)生變化。因此，建議48h左右進(jìn)行換液，當(dāng)培養(yǎng)板里的細(xì)胞密度達(dá)到90%左右就可以準(zhǔn)備傳代了。
貼壁細(xì)胞常用胰酶消化法。先棄掉上清，用PBS漂洗一次后加入適量的胰酶消化液，剛好覆蓋細(xì)胞即可。不同細(xì)胞的消化時(shí)間不同，需要去摸索，第一次操作，可在鏡下多觀察幾次，當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯，形態(tài)有變圓的趨勢時(shí)最理想（FTC133消化2 min、Hcclm3消化5min）。胰酶消化完成，加入培養(yǎng)基中和胰酶，輕輕吹打收集細(xì)胞至離心管，離心去除上清。再次加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按照1:1-1:6的比例分到多個(gè)培養(yǎng)皿中，補(bǔ)充培養(yǎng)液后放入培養(yǎng)箱即可。
03細(xì)胞凍存
細(xì)胞凍存是重中之重，新的細(xì)胞一定要進(jìn)行凍存保種，防止后續(xù)細(xì)胞傳代次數(shù)過多、狀態(tài)差、污染等問題出現(xiàn)時(shí)無細(xì)胞可用。細(xì)胞凍存與傳代步驟有相同之處，不同的是消化收集細(xì)胞后使用凍存液（90%血清+10%DMSO）重懸細(xì)胞，然后分裝進(jìn)凍存管中，轉(zhuǎn)移至凍存盒，-80℃過夜后即可轉(zhuǎn)入液氮長期保存。
細(xì)胞的培養(yǎng)過程其實(shí)也沒有你想象的那么難，把握好細(xì)節(jié)，離成功就不遠(yuǎn)了。另外，小趣也總結(jié)了一些經(jīng)驗(yàn)供大家參考學(xué)習(xí)。如果您有這方面的需求，我們也提供細(xì)胞相關(guān)的技術(shù)服務(wù)。
無菌意識(shí)一定要強(qiáng)。試劑、耗材必須無菌，操作前、后超凈臺(tái)滅菌處理
根據(jù)不同細(xì)胞特性使用不同的培養(yǎng)液，不建議與別人共用同一瓶試劑
培養(yǎng)多種細(xì)胞，操作時(shí)避免交叉污染
細(xì)胞操作時(shí)、打開培養(yǎng)箱取、放細(xì)胞時(shí)盡可能不要說話
文/阿趣代謝組學(xué)
01細(xì)胞復(fù)蘇
細(xì)胞從哪里來呢？一般細(xì)胞株的話從專業(yè)的細(xì)胞庫購買就可以。原代細(xì)胞需要從組織進(jìn)行分離，且原代細(xì)胞分離后傳代次數(shù)非常有限，僅僅幾代狀態(tài)就開始下滑。細(xì)胞復(fù)蘇之前的準(zhǔn)備工作至關(guān)重要。培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、槍頭進(jìn)行消毒、滅菌處理（小趣使用的是一款可以高溫滅菌的培養(yǎng)箱，輕松了很多）。針對細(xì)胞準(zhǔn)備特定的培養(yǎng)基以及高品質(zhì)的胎牛血清、雙抗；此外就是細(xì)胞的“家”了！大家一定注意可不能使用劣質(zhì)的培養(yǎng)皿/瓶，否則貼壁類的細(xì)胞不貼壁。細(xì)胞復(fù)蘇的基本流程已給大家梳理好了。
02細(xì)胞傳代
細(xì)胞復(fù)蘇工作完成后，就靜待細(xì)胞慢慢成長吧，細(xì)胞在生長的過程中會(huì)消耗營養(yǎng)，產(chǎn)生代謝物，培養(yǎng)液pH會(huì)發(fā)生變化。因此，建議48h左右進(jìn)行換液，當(dāng)培養(yǎng)板里的細(xì)胞密度達(dá)到90%左右就可以準(zhǔn)備傳代了。
貼壁細(xì)胞常用胰酶消化法。先棄掉上清，用PBS漂洗一次后加入適量的胰酶消化液，剛好覆蓋細(xì)胞即可。不同細(xì)胞的消化時(shí)間不同，需要去摸索，第一次操作，可在鏡下多觀察幾次，當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯，形態(tài)有變圓的趨勢時(shí)最理想（FTC133消化2 min、Hcclm3消化5min）。胰酶消化完成，加入培養(yǎng)基中和胰酶，輕輕吹打收集細(xì)胞至離心管，離心去除上清。再次加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按照1:1-1:6的比例分到多個(gè)培養(yǎng)皿中，補(bǔ)充培養(yǎng)液后放入培養(yǎng)箱即可。
03細(xì)胞凍存
細(xì)胞凍存是重中之重，新的細(xì)胞一定要進(jìn)行凍存保種，防止后續(xù)細(xì)胞傳代次數(shù)過多、狀態(tài)差、污染等問題出現(xiàn)時(shí)無細(xì)胞可用。細(xì)胞凍存與傳代步驟有相同之處，不同的是消化收集細(xì)胞后使用凍存液（90%血清+10%DMSO）重懸細(xì)胞，然后分裝進(jìn)凍存管中，轉(zhuǎn)移至凍存盒，-80℃過夜后即可轉(zhuǎn)入液氮長期保存。
無菌意識(shí)一定要強(qiáng)。試劑、耗材必須無菌，操作前、后超凈臺(tái)滅菌處理
根據(jù)不同細(xì)胞特性使用不同的培養(yǎng)液，不建議與別人共用同一瓶試劑
培養(yǎng)多種細(xì)胞，操作時(shí)避免交叉污染
細(xì)胞操作時(shí)、打開培養(yǎng)箱取、放細(xì)胞時(shí)盡可能不要說話
文/阿趣代謝組學(xué)
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