1.1.1實驗動物
選取32只8周齡SPF級SD雄性大鼠,體重約180~220g。飼養(yǎng)環(huán)境:允許大鼠在恒定溫度、濕度和光暗循環(huán)(20~25℃;55%±10%;7:00~19:00光照循環(huán))下自由飲水和攝食。
1.1.2主要試劑和儀器
SDZ-ⅡB型華佗牌電子針療儀(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司,中國),visutrack動物行為分析系統(tǒng)(上海欣軟信息科技有限公司);XR-XZ301 曠場實驗箱,XR-XM101Morris水迷宮(上海欣軟信息科技有限公司)
1.2方法
1.2.1動物分組與造模
將SD大鼠按曠場實驗隨機分為對照組、模型組、NLRP3阻斷劑(MCC950)組、電針(EA)組,每組8只。除對照組外,其余各組皆采用孤養(yǎng)聯(lián)合慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激(CUMS)復(fù)制大鼠抑郁模型。應(yīng)激方法包括:晝夜顛倒12h/12h、4℃冰水浴5min、禁食24h、禁水24h、夾尾1min、潮濕墊料24h、熱板52℃5min,各組大鼠每天采用同1種刺激方式,每種刺激方式使用3~4次,且同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)。
1.2.2干預(yù)治療
在大鼠每天應(yīng)激后1h,給予NLRP3阻斷劑MCC950和電針組干預(yù)治療。MCC950組[9]:將MCC950粉末溶解在無菌生理鹽水中,制成3mg/kg的MCC950溶液,大鼠放置于固定裝置中,用酒精擦拭鼠尾,使用1mL的注射器將MCC950溶液緩慢注射入側(cè)尾靜脈,給藥體積為1mL/kg。電針組:參考《實驗針灸學(xué)》,選擇“百會”和“印堂”穴,將SD大鼠固定在鼠板上,采用華佗牌針(0.25×13mm)向后平刺4~6mm,針柄處連接華佗牌SDZ-IIB型電子針療儀,電流輸出強度1~2mA,疏密波型,刺激20min,每日1次,連續(xù)21d。對照組給予相同時間相同時長的固定。
1.2.3曠場實驗
分別于造模前和治療結(jié)束后,進行曠場實驗,將大鼠放入黑色敞箱(100cm×100cm×40cm)角落,觀察4min,記錄各組大鼠后3min內(nèi)水平運動格子數(shù)(四爪皆入記1次)和垂直豎立次數(shù)(兩爪騰空放下記1次),以總運動量判斷大鼠自主活動能力。
1.2.4Morris水迷宮實驗
在治療結(jié)束后,第1~4天進行定位航行實驗檢測大鼠學(xué)習(xí)能力,每天將大鼠從4個不同象限面向池壁放入,觀察60s內(nèi)大鼠爬上平臺的逃避潛伏(Escapelatency,EL)。第5天進行空間探索實驗檢測大鼠記憶能力,移除平臺后大鼠從對立象限放入,記錄90s內(nèi)大鼠在目標(biāo)象限的空間探索時間(spaceexplorationtime,SET)。
1.3統(tǒng)計學(xué)分析
采用統(tǒng)計軟件SPSS17.0進行統(tǒng)計分析,計量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用單因素方差(One-way-ANOVA)分析,不服從正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗,P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1造模前后自主活動變化
曠場實驗結(jié)果如圖1所示,造模前各組間大鼠自主活動次數(shù)無明顯差異(P>0.05);給藥后,與對照組比較,模型組大鼠活動量明顯下降,電針刺激或藥物干預(yù)后,大鼠的自主活動能力明顯增加(P<0.05,P<0.01),有顯著性差異;提示,電針可明顯改善抑郁癥大鼠的抑郁樣行為。
2.2學(xué)習(xí)記憶能力變化
Morris水迷宮實驗檢測結(jié)果如圖2,3所示,給藥結(jié)束后前4d進行逃避潛伏期測試,第5天進行空間探索時間測試,與對照組比較,模型組大鼠逃避潛伏期明顯增加,空間探索時間顯著減少;與模型組比較,電針組和NLRP3阻斷劑組大鼠的逃避潛伏期相對減少,空間探索時間有所增加(P<0.05,P<0.01),差異有顯著性;提示,電針應(yīng)激可以加強抑郁大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
3 討論
本研究采用行為學(xué)評價系統(tǒng)檢測證實,電針刺激抑郁癥大鼠的百會和印堂穴位可明顯改善其抑郁樣行為,以及學(xué)習(xí)記憶能力。
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