瑞替加濱（retigabine，RTG）是一種作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的鉀離子通道開放劑，能夠改善急性應(yīng)激所導(dǎo)致的空間記憶障礙，本研究采用長(zhǎng)期反復(fù)低溫水浸束縛方法建立大鼠慢性應(yīng)激模型，通過觀察RTG對(duì)慢性應(yīng)激抑郁樣大鼠和正常成年大鼠的行為學(xué)，以評(píng)價(jià)RTG的抗抑郁癥狀的有效性。

1 藥物和試劑
瑞替加濱（上海麥克林生化科技有限公司，規(guī)格:250mg，純度:98%）

2 儀器
SuperMaze+高通量動(dòng)物行為實(shí)驗(yàn)分析軟件（上海欣軟信息科技有限公司）；SuperFst高通量強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)軟件（上海欣軟信息科技有限公司）。

3 動(dòng)物分組與給藥
方法成年雌性SD大鼠32只，35～42d，體質(zhì)量180～220g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于專用的動(dòng)物房，飼養(yǎng)環(huán)境恒定溫度為23℃、濕度為60%，保持光照／黑暗12ｈ恒定循環(huán)，自由飲水和攝食。SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、RTG高劑量組（4mg·kg-1）和RTG低劑量組（2mg·kg-1），每組8只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。RTG用含1%吐溫80的生理鹽水配成濃度為0.8mg·mL-1的溶劑進(jìn)行腹腔注射。

4 慢性應(yīng)激模型建立
使用自制大鼠固定器，固定大鼠于狹小空間中，限制其自由活動(dòng)。正常組大鼠腹腔注射生理鹽水但不給予應(yīng)激刺激；RTG處理組大鼠于每天應(yīng)激前1ｈ腹腔注射藥物，隨后與模型組大鼠一起束縛合并冷水浸泡應(yīng)激，持續(xù)8ｈ，連續(xù)21ｄ。應(yīng)激結(jié)束后，烘干回籠。每天應(yīng)激刺激時(shí)間統(tǒng)一在9:00～17:00。

5 行為學(xué)檢測(cè)方案
5.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)將大鼠放置于敞箱中心格內(nèi)（敞箱大小100cm×100cm×40cm，敞箱內(nèi)壁為黑色，底面平均分為25格），大鼠在敞箱內(nèi)自由活動(dòng)5min，錄像記錄下運(yùn)動(dòng)軌跡，分析其總運(yùn)動(dòng)距離，平均運(yùn)動(dòng)速度以及在中央?yún)^(qū)域停留的時(shí)間。每只大鼠結(jié)束測(cè)量后，均用７5%乙醇徹底清潔敞箱。
5.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)
將大鼠單獨(dú)放入玻璃水缸中（直徑25cm、高45cm、水深30cm），水溫為（25±1）℃，游泳5miｎ，記錄大鼠靜止不動(dòng)時(shí)間（大鼠停止掙扎，僅靠四肢輕微活動(dòng)漂浮在水上的時(shí)間）。
5.3 糖水偏好實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)分3ｄ進(jìn)行，ｄ1給予每組大鼠2瓶相同的1%蔗糖溶液，自由飲用。ｄ2替換成1瓶1%蔗糖溶液和1瓶純水，自由飲用。禁水禁食12ｈ后，將大鼠單籠放置，給予1%蔗糖溶液、純水各1瓶，中途互換位置1次，4ｈ后測(cè)量計(jì)算糖水偏好度:糖水偏好度＝（蔗糖水消耗量）／（蔗糖消耗量＋純水消耗量）×100%。

6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
所有數(shù)據(jù)用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間數(shù)據(jù)比較運(yùn)用單因素方差分析，數(shù)據(jù)均采用ｘ±s表示，圖表用GraphpadPrism5.0繪制展示，組間比較，P<0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果
在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，相對(duì)于正常組，模型組大鼠活動(dòng)總路程、平均運(yùn)動(dòng)速度以及中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間明顯下降；與模型組相比，RTG干預(yù)后大鼠活動(dòng)總路程、平均運(yùn)動(dòng)速度以及中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間均顯著上升，抑郁樣癥狀得到改善。

在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠較正常組在強(qiáng)迫游泳中不動(dòng)的時(shí)間顯著延長(zhǎng)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與模型組比較，RTG處理組均明顯縮短大鼠不動(dòng)時(shí)間，表明抑郁癥狀得到緩解。

在糖水偏好實(shí)驗(yàn)中，與正常組相比，模型組大鼠對(duì)糖水的偏愛程度顯著降低；與模型組比較，RTG干預(yù)后，大鼠糖水偏好程度增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，結(jié)果見表1。表明RTG能改善慢性應(yīng)激引起的快感缺失大鼠的抑郁樣狀態(tài)。