注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
研究意義：微量法100T/96S

測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測定原理：
DPPH·為穩(wěn)定的自由基 ，溶于甲醇，乙醇等極性溶劑中，在 515nm 處有最大吸收。向DPPH·溶液中加入抗氧化劑時，會發(fā)生脫色反應(yīng)，因此可用吸光度的變化并以 Trolox 作為對照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品：
恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：
提取液：液體 120mL×1 瓶，使用前預(yù)冷。試劑一：液體 45mL×1  瓶，避光保存。

樣品的制備：
(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA  抗凝）4℃，5000rpm  離心
10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過
30 d）后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL
提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
(3) 細(xì)胞樣品
按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入
1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，
4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

操作步驟：
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 515nm。
2、操作表（在 EP 管中反應(yīng)）

	空白管	測定管
提取液（μL）	20
樣品（μL）		20
試劑一（μL）	380	380
充分混勻，室溫避光反應(yīng) 20min，取 200μL 至 96 孔板測定 515nm 吸光值，△A= A 空白-A 測定

注意：空白管只需測定一次，若A 測定小于 0.2，需用提取液稀釋后檢測。