明暗箱實(shí)驗(yàn)也叫光/暗轉(zhuǎn)換測(cè)試 (LDT) ，是用于測(cè)量小鼠焦慮樣行為的最廣泛使用的測(cè)試之一。該測(cè)試基于小鼠對(duì)明亮區(qū)域的自然厭惡以及它們對(duì)輕度壓力源（例如新環(huán)境和光線）的自發(fā)探索行為。該測(cè)試對(duì)抗焦慮藥物治療也很敏感。測(cè)試裝置由一個(gè)盒子組成，盒子分為一個(gè)�。ㄈ�分之一）暗室和一個(gè)大（三分之二）明亮的照明室。將小鼠放入照明的隔間中，并允許在兩個(gè)室之間自由移動(dòng)。進(jìn)入暗室的第一個(gè)潛伏期和在亮室中花費(fèi)的總時(shí)間是小鼠明亮空間焦慮的指標(biāo)。由于隨著時(shí)間的推移習(xí)慣化，轉(zhuǎn)換是活動(dòng)探索的指標(biāo)。LDT 快速且易于使用，無(wú)需事先對(duì)動(dòng)物進(jìn)行培訓(xùn)。在這里，我們提出了我們的協(xié)議，該協(xié)議能夠檢測(cè)小鼠的抗焦慮樣（減少焦慮）和類(lèi)焦慮（增加焦慮）行為。
01 實(shí)驗(yàn)介紹

明暗箱實(shí)驗(yàn)也叫光/暗轉(zhuǎn)換測(cè)試 (LDT) ，是用于測(cè)量小鼠焦慮樣行為的最廣泛使用的測(cè)試之一。該測(cè)試基于小鼠對(duì)明亮區(qū)域的自然厭惡以及它們對(duì)輕度壓力源（例如新環(huán)境和光線）的自發(fā)探索行為。該測(cè)試對(duì)抗焦慮藥物治療也很敏感。測(cè)試裝置由一個(gè)盒子組成，盒子分為一個(gè)�。ㄈ�分之一）暗室和一個(gè)大（三分之二）明亮的照明室。將小鼠放入照明的隔間中，并允許在兩個(gè)室之間自由移動(dòng)。進(jìn)入暗室的第一個(gè)潛伏期和在亮室中花費(fèi)的總時(shí)間是小鼠明亮空間焦慮的指標(biāo)。由于隨著時(shí)間的推移習(xí)慣化，轉(zhuǎn)換是活動(dòng)探索的指標(biāo)。LDT 快速且易于使用，無(wú)需事先對(duì)動(dòng)物進(jìn)行培訓(xùn)。在這里，我們提出了我們的協(xié)議，該協(xié)議能夠檢測(cè)小鼠的抗焦慮樣（減少焦慮）和類(lèi)焦慮（增加焦慮）行為。

04 動(dòng)物行為分析軟件
VisuTrack，型號(hào)：XR-VT（用于自動(dòng)分析的計(jì)算機(jī)軟件），上海欣軟
1.系統(tǒng)擁有多種識(shí)別算法：智能識(shí)別法、灰度法、靜態(tài)背景法、動(dòng)態(tài)背景法以及高斯背景法，可自動(dòng)識(shí)別動(dòng)物的活動(dòng)狀態(tài)及睡眠狀態(tài)，并可生成可視化的矢量圖、運(yùn)動(dòng)軌跡圖、熱圖（2D、3D）以及活動(dòng)量圖（2D、3D）等；
2.系統(tǒng)擁有完善的外部輸入輸出控制，將行為與生物信號(hào)（腦電圖、血壓、神經(jīng)元活動(dòng)、超聲波發(fā)聲）和實(shí)驗(yàn)刺激（聲音、光、電擊等）整合；
3.軟件對(duì)動(dòng)物形體進(jìn)行全局分析，以檢測(cè)鼻尖（Nose position）、前部軀體中心（Forebody Center）、身體中心（Animal Center）和尾根（Tail Base position）四個(gè)特征點(diǎn)，并據(jù)此分析動(dòng)物行為；
4.系統(tǒng)可以全自動(dòng)分析更多實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的精細(xì)行為, 如爬行/靜止/原地微動(dòng),擺頭/甩頭,理毛修飾,轉(zhuǎn)圈,支撐站立,靠邊行走，嗅探，伸長(zhǎng)，身體彎曲等，并可以生成相應(yīng)時(shí)間內(nèi)的動(dòng)物行為圖譜及節(jié)律時(shí)序圖；
5.系統(tǒng)包含了GLP模塊（GLP Module），可以實(shí)現(xiàn)用戶(hù)權(quán)限、用戶(hù)策略分配，系統(tǒng)自帶管理員模式、審閱用戶(hù)模式以及實(shí)驗(yàn)員模式，對(duì)應(yīng)有不同的軟件使用權(quán)限，并可以導(dǎo)出符合GLP要求的操作日志表以及審閱日志表，同時(shí)可以開(kāi)展動(dòng)物行為“雙盲”實(shí)驗(yàn)；
6.同一套軟件可以在同一臺(tái)電腦上同一時(shí)刻在線或離線分析不同的動(dòng)物行為實(shí)驗(yàn)，提高實(shí)驗(yàn)效率的同時(shí)更增加了藥效評(píng)價(jià)的可靠性、實(shí)時(shí)性以及同步性，且分析結(jié)束后數(shù)據(jù)會(huì)自動(dòng)按照實(shí)驗(yàn)類(lèi)別歸類(lèi)；
05 實(shí)驗(yàn)步驟protocol
該設(shè)備放置在一個(gè)隔離的房間中，遠(yuǎn)離任何外部干擾和噪音，使用低強(qiáng)度白光源。
實(shí)驗(yàn)者必須注意，不能在測(cè)試過(guò)程中發(fā)出任何過(guò)大的噪音以及佩戴氣味強(qiáng)烈的氣味產(chǎn)品，因?yàn)樗�可能�?duì)小鼠產(chǎn)生焦慮刺激。
光照室中的照明必須為 200-400 勒克斯或更高，而另一個(gè)室則為暗室（5 勒克斯或更低）。
實(shí)驗(yàn)前將小鼠在其家籠中轉(zhuǎn)移到行為測(cè)試室至少 30 分鐘。
用 70% 乙醇清潔設(shè)備的兩個(gè)隔間。
打開(kāi)相機(jī)并將一只老鼠放在明亮的房間中間。
實(shí)驗(yàn)者盡可能遠(yuǎn)離盒子和測(cè)試動(dòng)物的視線之外。
允許動(dòng)物在兩個(gè)腔室之間自由移動(dòng) 5 分鐘。
每次試驗(yàn)后，去除所有尿液和糞便，并用 70% 乙醇清潔兩個(gè)腔室。
錄制的視頻可以通過(guò)VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件（上海欣軟）自動(dòng)分析。對(duì)以下參數(shù)進(jìn)行評(píng)分（圖 2）：
進(jìn)入暗室的潛伏時(shí)間。
在明箱和暗箱中分別花費(fèi)的時(shí)間。
在明箱中的活動(dòng)距離。
明暗箱進(jìn)入的轉(zhuǎn)換次數(shù)。


06 注意事項(xiàng)
LDT 最初是由 Crawley 及其同事開(kāi)發(fā)的（Crawley 和 Goodwin，1980）。原始版本和我們的測(cè)試有兩個(gè)不同之處。首先，原始版本的測(cè)試持續(xù)時(shí)間為 10 分鐘，而我們只使用了 5 分鐘的測(cè)試時(shí)間。其次，在原始版本中，照明隔間的墻壁是透明的，而我們使用不透明的白色塑料作為墻壁。因此，與原始版本相比，我們的改進(jìn)更具體地檢測(cè)明亮空間焦慮，其中也對(duì)開(kāi)放空間焦慮進(jìn)行評(píng)分。
通常，雄性小鼠用于該行為實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榘l(fā)情周期的變化可能會(huì)影響雌性在此類(lèi)測(cè)試中的表現(xiàn)。
基線活動(dòng)可能因小鼠品系和年齡而異。
為了保證均勻的光度，使用間接光來(lái)避免陰影的產(chǎn)生，這可以成為動(dòng)物的首選。
在對(duì)每只動(dòng)物進(jìn)行測(cè)試后，必須始終清潔兩個(gè)隔間，并在清潔后完全干燥，因?yàn)榍鍧崉┑膹?qiáng)烈氣味可能會(huì)改變小鼠的行為。
僅當(dāng)動(dòng)物將 2 個(gè)前爪和一半身體進(jìn)入其中時(shí)，才考慮進(jìn)入明亮或黑暗的隔間。如果動(dòng)物用這兩只爪子返回隔間，則不記錄進(jìn)入。VisuTrack軟件有單獨(dú)的設(shè)置動(dòng)物進(jìn)入?yún)^(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)（可自定義）。

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上海欣軟是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售于一體的的高新技術(shù)企業(yè)，是專(zhuān)業(yè)的動(dòng)物行為視頻分析方案解決商。我司專(zhuān)注于動(dòng)物神經(jīng)科學(xué)與行為學(xué)產(chǎn)品的研究且致力于向高校、科研機(jī)構(gòu)等領(lǐng)域提供實(shí)驗(yàn)室一體化方案，業(yè)務(wù)范圍遍布全國(guó)上百家實(shí)驗(yàn)室。公司主營(yíng)產(chǎn)品均為自主開(kāi)發(fā), 擁有100%核心技術(shù)，同時(shí)公司擁有數(shù)位動(dòng)物行為學(xué)儀器行業(yè)從事10年以上的資深服務(wù)工程師，可為我們的產(chǎn)品提供全方案的售前及售后服務(wù)。我司開(kāi)發(fā)的儀器設(shè)備都是科學(xué)研究所必備且不可替代的。

• 動(dòng)物行為分析軟件：

1、VisuTrack軟件

2、SuperMaze軟件

3、FishTrack斑馬魚(yú)分析軟件

• 動(dòng)物行為儀器：

1、自身給藥、條件恐懼、斯金納、震驚反射（PPI）、跑步機(jī)、各類(lèi)經(jīng)典迷宮等

2、動(dòng)物抓撓分析儀、動(dòng)物震顫行為分析儀、動(dòng)物捕食行為分析儀

3、動(dòng)物主動(dòng)步態(tài)分析、動(dòng)物被動(dòng)步態(tài)分析、動(dòng)物自由步態(tài)分析（內(nèi)測(cè)中）

4、睡眠剝奪儀、體溫維持儀、智能熱板儀、轉(zhuǎn)棒疲勞儀、鼠尾光照測(cè)痛儀等

• 神經(jīng)電生理：

1、光遺傳、無(wú)線光遺傳

2、光纖記錄系統(tǒng)（單通道、多通道）

3、電生理信號(hào)采集系統(tǒng)（腦電、肌電等）