小鼠皮膚瘙癢模型的建立及抓癢行為學(xué)檢測方法
瀏覽次數(shù):2101 發(fā)布日期:2022-3-8
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動物瘙癢模型的建立及抓癢行為學(xué)評價方法
一.摘要
瘙癢是一種皮膚神經(jīng)官能癥疾患。臨床上將只有皮膚瘙癢而無原發(fā)性皮膚損害者稱之為瘙癢癥。目前瘙癢的發(fā)病機制尚不確定,現(xiàn)有動物模型多只是反映瘙癢的某些特點,以西醫(yī)指標(biāo)評判為主。
二.造模動物
現(xiàn)用于制備瘙癢模型的動物有主要有小鼠、大鼠、豚鼠和家兔等,以小鼠、豚鼠更為常用。常選用成年動物,雌雄各半。
三.造模方法
1. 磷酸組胺誘發(fā)制備豚鼠瘙癢模型
1.1 原理 組胺受體是一類G蛋白偶聯(lián)受體,通過激活瞬時感受器電位受體,繼而激活一系列的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo),從而導(dǎo)致瘙癢。
1.2 方法 清潔級豚鼠,體質(zhì)量250-280g,雌雄各半。實驗前48 h先將豚鼠右后足背剪毛,脫毛劑脫毛,面積約1cm2。實驗當(dāng)日再將脫毛處皮膚用細(xì)砂紙輕輕擦傷,使之發(fā)紅,以滲血但不出血為度。于創(chuàng)傷處涂抹0.05%的磷酸組胺30μL/只(或0.01%的磷酸組胺50μL/只),30min內(nèi)豚鼠如不出現(xiàn)瘙癢反應(yīng)(即舔右后足創(chuàng)傷部位的動作),需再涂抹1次組胺,如此重復(fù)操作,直至出現(xiàn)為止。記錄涂抹組織胺的次數(shù)及累積用量。也可將磷酸組胺換成2%的5-羥色胺10μL,同上法制備豚鼠瘙癢模型。
2.
右旋糖酐誘發(fā)制備小鼠瘙癢模型
2.1 原理 右旋糖酐可誘導(dǎo)機體釋放內(nèi)源性組織胺,使小鼠產(chǎn)生皮膚瘙癢。
2.2 方法 SPF級昆明種小鼠,18-21g,雌雄各半。小鼠尾靜脈注射0.025%右旋糖酐0.05mL/10g(1.25mg/kg)。以小鼠前爪搔抓頭部、后爪搔抓軀干、嘴咬全身各部位作為瘙癢指征,模型成功。觀察記錄30min內(nèi)小鼠搔癢次數(shù)及搔癢持續(xù)時間。
3.氨基吡啶(4-AP)誘發(fā)制備小鼠瘙癢模型
3.1 原理 4-AP可促機體肥大細(xì)胞釋放組胺,導(dǎo)致小鼠發(fā)生瘙癢癥狀。
3.2 方法 小鼠模型:SPF級昆明種小鼠,18-21g,雌雄各半。選擇小鼠背尾部作為注射部位,給小鼠背尾部皮下注射0.02%的4-AP溶液,0.1mL/只。小鼠持續(xù)的舔體后出現(xiàn)停頓計數(shù)1次,記錄10min內(nèi)各小鼠舔體次數(shù)。
4. 組胺和4-AP聯(lián)用誘發(fā)制備小鼠瘙癢模型
4.1 原理 組胺受體是一類G蛋白偶聯(lián)受體,組胺可興奮該受體導(dǎo)致瘙癢發(fā)生;4-AP是一種鉀通道阻滯劑,同時也具有促肥大細(xì)胞釋放組胺的作用。
4.2 方法 SPF級昆明種小鼠,體質(zhì)量18-21g,雌雄各半。小鼠提前1天用脫毛劑脫去頭頸部耳后部分皮膚的毛備用。實驗時,在脫毛部位皮下注射0.05%組胺和0.02%4-AP,每只注射
100μL,注射后立即置透明觀察箱中觀察30min,用數(shù)碼攝像機記錄。以小鼠后爪持續(xù)搔抓注射部位至停止記作1次搔抓(連續(xù)搔抓記作1次)。觀察搔抓潛伏期(注射結(jié)束至第1次搔抓開始的時間)和30min內(nèi)搔抓總次數(shù)。
四.
瘙癢模型的行為學(xué)評價方法
早期,動物瘙癢模型的評價手段還是以人眼觀察為主,通過錄像,然后人工掐秒表去核對抓撓次數(shù)和抓撓時間,費時費力,而且準(zhǔn)確率不高,為了解決這一痛點,
VisuScratch抓撓行為分析軟件基于圖像識別利用AI智能算法,自動檢測動物的抓癢次數(shù)和抓癢時間,同時還可以監(jiān)測抓撓的強度,最重要的一點,該套小動物抓癢行為學(xué)分析系統(tǒng)可以結(jié)合光遺傳或者鈣信號記錄系統(tǒng)等同步實驗,實現(xiàn)了抓癢行為檢測的同時能夠?qū)崟r監(jiān)測神經(jīng)元的活動情況。