固定床生物反應(yīng)器由于其剪切力低、操作穩(wěn)定，便于控制等優(yōu)點(diǎn)被廣泛地應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。使用天信和Cellcomb載體在固定床生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞，可延長(zhǎng)培養(yǎng)過(guò)程中連續(xù)灌流的時(shí)間，提高生產(chǎn)率，輕松實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的高密度大規(guī)模培養(yǎng)。

    下面為大家詳解天信和固定床生物反應(yīng)器貼壁細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟，以便您更好地理解貼壁細(xì)胞的操作過(guò)程。

操作步驟詳解
 

一、清洗固定床生物反應(yīng)器

1. 擰掉頂蓋上的密封螺絲，取出罐體頂蓋和固定籃；

2. 用純化水沖洗玻璃罐內(nèi)外壁和法蘭盤；

3. 用柔軟紗布擦洗罐體內(nèi)部；

4. 反復(fù)沖洗固定篩片、套管、深層通氣管等；

5. 用柔軟紗布擦洗電極、槳葉等所有組件；

6. 用注射用水沖洗罐體內(nèi)外壁和所有組件。
 

二、安裝固定床生物反應(yīng)器

1. 倒入已經(jīng)完全膨脹、濕潤(rùn)的Cellcomb載體；

2. Cellcomb載體分布均勻后，下調(diào)固定籃上篩片，然后擰緊固定螺絲；

3. 倒入pH為7.4左右的PBS溶液清洗1次；

4. 再次倒入PBS溶液沒(méi)過(guò)載體、電極；

5. 安裝好頂蓋并擰緊螺絲；

6. 安裝工藝軟管并用止血鉗夾緊軟管；

7. 氣密性檢查：通入壓縮空氣，罐內(nèi)壓力升到0.5bar左右，停止通氣并夾緊進(jìn)氣軟管，放置6h檢查罐體內(nèi)的氣壓，6h后壓力表沒(méi)有變化，則表示氣密性良好；

8. 高壓滅菌：打開尾氣、表層進(jìn)氣管路上止血鉗，將罐體及所有組件進(jìn)行高壓滅菌，滅菌程序?yàn)槌�口液體程序121℃，45分鐘；

9. 滅菌結(jié)束后取出罐體，并放置至室溫；

10. 將反應(yīng)器罐體與控制器連接，連接溫度、DO、pH、加熱毯、攪拌電機(jī)等；

11. 在無(wú)菌環(huán)境下將反應(yīng)器與廢液桶、培養(yǎng)液桶、接種瓶等連接；

12. 接入壓縮空氣，將反應(yīng)器罐內(nèi)PBS通過(guò)管路排至廢液桶，用細(xì)胞培養(yǎng)液清洗載體2次；

13. 再次加入細(xì)胞培養(yǎng)液，沒(méi)過(guò)攪拌槳葉、pH電極等，調(diào)整反應(yīng)器參數(shù)，進(jìn)行細(xì)胞預(yù)培養(yǎng)。
 

三、細(xì)胞貼壁培養(yǎng)

1. 接入待培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞；

2. 將溫度設(shè)置為37℃，溶氧為40%，pH值為7.0左右進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；

3. 每24小時(shí)在線取樣一次，進(jìn)行生化檢測(cè)和pH值測(cè)量；

溫馨提示：共取兩管樣品，第一管廢棄，只保留第二管樣品；液體單向流動(dòng)，只出不進(jìn)。

4. 取樣后將取樣管末端浸入75%的酒精。

溫馨提示：每24小時(shí)或每次操作都需填寫生物反應(yīng)器操作記錄
 

四、下罐操作

1. 關(guān)掉控制面板上的所有的自動(dòng)控制，只保留攪拌功能；

2. 用止血鉗夾住深層進(jìn)氣和尾氣出氣，開啟表層進(jìn)氣，并調(diào)節(jié)進(jìn)氣流量；

3. 拆掉加熱毯，關(guān)掉攪拌功能，松開進(jìn)氣管道；

4. 將罐內(nèi)培養(yǎng)液排入廢液桶；

5. 排液完成后，夾緊進(jìn)氣管道和排液管道；

6. 斷開電極與控制柜的連接，拆掉所有管路和附件；

7. 拆掉頂蓋螺絲，打開頂蓋，擰掉固定籃上的螺絲，取出上篩片；

8. 取樣：分別在上層、中層及下層各取0.5g Cellcomb載體樣品；

9. 在Cellcomb載體樣品中加入10ml結(jié)晶紫，將加入結(jié)晶紫的載體樣品放入搖床中（過(guò)夜后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)）；

10. 用純化水反復(fù)沖洗反應(yīng)器固定篩片，并用柔軟紗布擦洗，仔細(xì)沖洗、擦拭罐體內(nèi)外壁、漿葉及其他組件；

11. 清洗完成后擰上頂蓋螺絲，罐體內(nèi)裝滿0.1M的氫氧化鈉浸泡過(guò)夜。

五、細(xì)胞計(jì)數(shù)

過(guò)夜后對(duì)Cellcomb載體樣品進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)：

1. 從搖床中取出載體樣品并充分搖晃；

2. 在EP管內(nèi)加入PBS溶液，將樣品移入EP管中進(jìn)行稀釋；

3. 用移液槍反復(fù)吹打細(xì)胞懸液；

4. 將稀釋后的細(xì)胞懸液打在細(xì)胞計(jì)數(shù)板上；

5. 在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。


觀看操作視頻

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