1、購買細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少的情形?

研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。

 

2、有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

 

3、血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

 

4、細胞培養(yǎng)時能否更換胎牛血清?

首先要確定更換胎牛血清的理由，如果細胞培養(yǎng)無異常的話，不建議隨意更換不同品牌和來源的胎牛血清。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的來源(血源地)和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同地域和等級的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞死亡。

如果是使用的胎牛血清出現(xiàn)了問題，比如保存不當或操作不當導致血清成分析出、混濁、污染等情況，可以優(yōu)先更換同品牌、等級、批次的血清;如果是產(chǎn)品質(zhì)量問題更換血清品牌的話，需要用一批細胞進行預實驗才行，以保證細胞能夠正常培養(yǎng)。

另外在購買胎牛血清的時候要選擇正規(guī)來源和經(jīng)過海關(guān)檢疫胎牛血清，非正規(guī)來源的胎牛血清有很多安全隱患，對實驗室、操作人員、細胞培養(yǎng)、實驗數(shù)據(jù)都有很大的影響。

 

5、培養(yǎng)細胞什么時候需要換液?

視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。

 

6、培養(yǎng)基到底要不要加抗生素?

除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。如果是沒有進行過細胞培養(yǎng)的新手，對無菌技術(shù)沒有信心的，或者提取的原代細胞，怕污染的，可以適量添加抗生素�？股�素本身也是有毒性的，有些抗生素的藥效濃度水平與毒效濃度水平非常接近，對細胞多少有傷害

 

7、培養(yǎng)基里的粉紅色是什么?

酚紅一般作為培養(yǎng)基中pH值的指標：當培養(yǎng)基呈中性時為紅色，呈酸性時為黃色，堿性時為紫色。另外，酚紅可以模擬類固醇激素(特別是雌激素)的作用。如果要避免類固醇反應，可以在無酚紅的培養(yǎng)基里進行培養(yǎng)

 

8、如何避免細胞培養(yǎng)過程中的污染?

主要還是考慮無菌環(huán)境，盡量做好操作臺的滅菌，別把培養(yǎng)基滴落在生物安全柜的入風口，別在培養(yǎng)箱里把培養(yǎng)基打翻。這兩個地方霉菌一旦滋生，那你就只能等著用甲醛熏蒸了。

紫外無法殺滅霉菌，酒精也不行，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全。復蘇的時候，水浴鍋也需要進行滅菌處理。一旦出現(xiàn)污染，不要急，能救的就用抗生素救一下，但是一般情況下，選擇扔掉。避免交叉感染，要不只能整個實驗室消毒了。

 

 

上海中喬新舟生物科技有限公司

1、原代細胞：人臍靜脈內(nèi)皮細胞、人臍帶間充質(zhì)干細胞、人脂肪間充質(zhì)干細胞、iPS誘導多能干細胞（可提供細胞流式及免疫熒光鑒定報告，需簽訂MTA協(xié)議）。

2、培養(yǎng)基：原代細胞專用低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。

3、細胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細胞實驗檢測試劑盒、細胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細胞裂解物等。

4、細胞系（株）：種類豐富，已通過STR鑒定；提供細胞株完全培養(yǎng)基。

5、自研產(chǎn)品：支原體檢測/清除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。

6、技術(shù)服務：細胞熒光標記服務（GFP/RFP/LUC）、干擾/過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建、細胞基因敲除、細胞系鑒定服務（STR）、原代細胞永生化、腫瘤細胞耐藥株構(gòu)建、原代細胞分離等。