40年突破！33萬小分子中篩出急性髓系白血病新靶點
 
AML（急性髓系白血�。�是一種讓人談之色變的絕癥，主要的治療方法是化療和造血干細胞移植，四十幾年來新藥寥寥無幾，目前靶向藥只有針對Bcl2的Venetoclax（維奈克拉），所以對于AML開發(fā)新的靶向藥顯得尤為重要和迫切。引發(fā)AML的原因是由于多個基因的突變，導致髓樣干細胞分化形成一群成熟白細胞的過程受到阻礙，以及未成熟的異常細胞的增殖。

轉錄因子HoxA9在70%的AML病人體內仍然維持活性，而在髓樣干細胞正常的分化過程中該基因必須被關閉。但是到目前為止還未發(fā)現(xiàn)針對HoxA9表達調節(jié)的抑制劑。美國麻省總醫(yī)院和哈佛干細胞研究所的研究人員在含有33萬個化合物的分子庫中篩選這種抑制劑，確定了新的AML的藥物靶點，并發(fā)表于Cell雜志上^[1]。是的！沒看錯，33萬個化合物！不用高通量手段是萬萬不行的！所以20分鐘即可分析一塊384孔板的高通量流式iQue^®大顯身手！

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iQue^® 高通量流式細胞儀
 
 
研究人員通過基因工程方法建立了能夠持續(xù)表達HoxA9的AML小鼠細胞髓樣細胞模型，將GFP（綠色熒光蛋白）和只有在成熟的白細胞中表達的溶菌素融合表達，當細胞達到成熟狀態(tài)就會發(fā)出綠色熒光。而且為了能讓HoxA9持續(xù)高效表達，將HoxA9和ER（雌激素受體）進行融合，可以通過ER的激活劑E2來對HoxA9的表達進行調節(jié)。
   
 
研究人員篩選了超過33萬個小分子（化合物來自于NIH Molecular Library Program’s Molecular Library Small-Molecule Repository (MLSMR)），希望找到能夠讓該細胞系產生綠色信號的小分子，綠色信號的出現(xiàn)意味著HoxA9 表達而導致的分化阻斷得到了疏通。
   
33萬個化合物，一共1000塊384孔板，iQue®可以接機械臂，1個小時可以篩選3塊384孔板，一天24小時輪轉可以測試72塊板，5天不到就可以全搞定啦！ 
 
最終篩選到12種化合物，其中有11種通過抑制一種叫做DHODH的代謝酶起到作用，截至這篇文章發(fā)表還沒有研究表明DHODH在髓樣干細胞分化過程中發(fā)揮作用。進一步實驗表明抑制DHODH的活性確實能夠誘導小鼠和人類AML細胞的分化。
隨后在幾種AML小鼠模型中檢測了一種已知的DHODH抑制劑Brequinar，發(fā)現(xiàn)了一套能夠抑制白血病的劑量方案，不但能夠延長生存時間，而且不會出現(xiàn)常規(guī)化療導致的副作用。
 
 
目前ASLAN公司的ASLAN003是一種口服的高活性DHODH抑制劑，有潛力成為AML治療的全球首創(chuàng)（first-in-class）藥物。該公司已經證明了ASLAN003對 DHODH 的有效抑制，且相比于第一代抑制劑和其他新的 AML 治療不存在相關的毒性，在 AML 患者中都有誘導細胞分化和適用性的潛力。ASLAN003被美國食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration）授予孤兒藥物稱號。目前根據clinicaltrials.gov提供的信息，已經完成了AML適應癥的II期臨床試驗（NCT03451084）[2]。    
可以說沒有iQue®高通量流式細胞儀，這個研究是完不成的。這款流式中的戰(zhàn)斗機為什么牛呢？
 

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-參考文獻-

1. Inhibition of Dihydroorotate Dehydrogenase Overcomes Differentiation Blockade in Acute Myeloid Leukemia.Cell
2. ASLAN003, a potent dihydroorotate dehydrogenase inhibitor for differentiation of acute myeloid leukemia | Haematologica