正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：
谷氨酰胺（Glutamine）是構(gòu)成人體蛋白質(zhì)所必需的20種氨基酸之一。是人體內(nèi)最普遍的、不可缺乏的條件性必需氨基酸，是構(gòu)成蛋白質(zhì)不可缺少的氨基酸之一，更是某些細胞培養(yǎng)中最基本的元素。由于谷氨酰胺不穩(wěn)定的特性，在細胞培養(yǎng)基的整合中，易自發(fā)性分解為谷氨酸和氨離子，而氨離子對細胞的毒性很強，因此，在細胞培養(yǎng)體系中，須密切關(guān)注谷氨酰胺的儲存壽命（SHELF LIFE）和實時監(jiān)測。
 
測定原理：谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒比色法說明書​
在谷氨酰胺酶（Glutaminase）作用下，谷氨酰胺發(fā)生脫氨基反應(yīng)，產(chǎn)生谷氨酸（glutamic acid）和氨離子；
谷氨酰胺+H₂O———————谷氨酸+NH₄⁺
然后用顯色劑進行顯色，顯色后在570nm下進行測定。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制：
試劑一：液體50mL×2瓶，4℃保存；
試劑二：液體1.5ml×1瓶，-20℃保存；
試劑三，粉劑×1瓶， 4℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑仍 4℃保存

谷氨酰胺提取：
1、細菌或培養(yǎng)細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g組織，加入2mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）或細胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積（mL）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.2mL血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液加入2mL試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒比色法說明書​

• 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。
• 在有蓋EP管中加入下列試劑：

試劑名稱（μL）	測定管	對照管1	對照管2
樣本	1000	1000
試劑一			1000
試劑二	10	10	10

混勻，37℃水浴30min（蓋緊，以防止水分散失），
 

試劑名稱（μL）	測定管	對照管1	對照管2
試劑三	200	200	200

90℃水浴20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于570nm波長處比色，
△A=A測定管 - A對照管1 - A對照管2。對照管2只要做一管。

谷氨酰胺含量計算：谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒比色法說明書​
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255；x為谷氨酰胺含量（µg/mL），y為吸光值。
2、按照血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液體積計算
谷氨酰胺含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)
3、按照蛋白濃度計算
谷氨酰胺含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計算
谷氨酰胺含量(µg/g鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
谷氨酰胺含量(μg/10⁴ cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積，0.2 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000：細菌或細胞總數(shù)，1000萬。

注意：
1、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酰胺含量測定，檢測下限為100µg/mL。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：100µg/mL -600µg/mL。
3、ΔA線性范圍為：0.01-2；若大于2則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。谷氨酰胺(Gln)含量測定試劑盒比色法說明書​