本期AVT小編有幸邀請(qǐng)到近期發(fā)表在《Advanced materials》刊物，影響因子IF 30.849 ，《Engineering Chameleon Prodrug Nanovesicles to Increase Antigen Presentation and Inhibit PD-L1 Expression for Circumventing Immune Resistance of Cancer》的作者，就該文章進(jìn)行了一次深入訪談，現(xiàn)將訪談內(nèi)容整理如下，供大家參考，對(duì)腫瘤免疫治療感興趣的小伙伴看過來�。�

艾博士：首先，非常榮幸邀請(qǐng)到了文章作者，能就腫瘤免疫治療這個(gè)熱門課題進(jìn)行一次深入的溝通交流，使得大家有機(jī)會(huì)窺伺到此研究方向的最新研究成果，在開始訪談之前，我們先介紹一下論文作者課題研究小組-上海藥物所于海軍課題組！

上海藥物所于海軍課題組主要研究大分子抗腫瘤藥物及新型藥物遞送系統(tǒng)。通過化學(xué)方法合成比較新穎的高分子聚合物載體，以此構(gòu)建納米遞送系統(tǒng)，從而實(shí)現(xiàn)藥物的腫瘤靶向遞送或時(shí)空響應(yīng)性遞送，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)治療腫瘤的理念。課題組在Sci Immunol，Cancer Cell, Nat Commun和Adv Mater等期刊發(fā)表論文百余篇，其中IF>10共40余篇，論文他引8000余次。申報(bào)中國發(fā)明專利15項(xiàng)（授權(quán)8項(xiàng)）。

 

 

艾博士：腫瘤免疫療法存在什么挑戰(zhàn)呢？

高晶：目前，腫瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)不足和免疫檢查點(diǎn)過表達(dá)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體先天和獲得性免疫耐受，造成免疫逃逸，嚴(yán)重影響腫瘤免疫治療效果，這也是腫瘤免疫治療亟需解決的問題。
 

艾博士：針對(duì)您說的挑戰(zhàn)，其背后的原因機(jī)理是什么？

高晶：腫瘤細(xì)胞通過主要組織相容性復(fù)合體I類（MHC-I）在其表面表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原，然后被細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞特異性識(shí)別（CTLs）而促使CTLs發(fā)揮腫瘤殺傷功能。然而，近期研究表明，腫瘤細(xì)胞可通過自噬途徑將MHC-I運(yùn)輸?shù)饺苊阁w并降解，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無法充分表達(dá)MHC-I。同時(shí)，腫瘤中浸潤的T淋巴細(xì)胞分泌干擾素γ（IFN-γ）可通過JAK-STAT信號(hào)通路上調(diào)腫瘤細(xì)胞表面程序性死亡配體1（PD-L1）的表達(dá)，PD-L1與CTLs表面的程序性死亡1（PD-1）結(jié)合，會(huì)導(dǎo)致CTLs失活并誘導(dǎo)免疫耐受。

 

艾博士：針對(duì)以上挑戰(zhàn)，你們課題小組是如何設(shè)計(jì)藥物的呢？

高晶：本課題中我們假設(shè)可以通過抑制腫瘤細(xì)胞的自噬而上調(diào)腫瘤細(xì)胞表面的MHC-I水平，同時(shí)阻斷BRD4通路而抑制PD-L1表達(dá)，從而克服雙重免疫耐受，提高免疫治療效果。

設(shè)計(jì)思路和機(jī)理如圖1所示：

 

 

圖1納米囊泡用于克服癌癥的非特異性免疫和適應(yīng)性免疫抵抗示意圖

 

針對(duì)上述假設(shè)，我們首先證明了通過強(qiáng)力霉素（Doxy）抑制自噬相關(guān)基因4B（ATG4B）可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞表面MHC-I的表達(dá)，其次結(jié)合BRD4抑制劑JQ1調(diào)控誘導(dǎo)的PD-L1的表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤治療過程中免疫耐受的改善。
 

為了實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性遞送強(qiáng)力霉素，我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)靶向腫瘤的納米囊泡（GPR@Doxy/JQ1），其應(yīng)用的磷脂材料含有磷酸膽堿基團(tuán)，自組裝形成兩親性磷脂雙層膜可荷載藥物，同時(shí)其空心的囊泡中間可包載疏水性小分子。該納米囊泡通過基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）介導(dǎo)的PEG“脫殼”可實(shí)現(xiàn)在腫瘤部位特異性積累和保留，隨后暴露的CRGDK配體促進(jìn)其在腫瘤深度穿透和腫瘤細(xì)胞的攝取。同時(shí)，納米囊泡通過負(fù)載IR-1061熒光染料在近紅外二區(qū)（NIR-Ⅱ）生物窗口（1000-1700 nm）實(shí)現(xiàn)熒光成像。在熒光成像引導(dǎo)下實(shí)施NIR-Ⅱ激光照射，該納米囊泡可實(shí)現(xiàn)時(shí)空可控釋放Doxy，抑制腫瘤細(xì)胞自噬并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞MHC-I表達(dá)；同時(shí)釋放JQ1前藥分子并在腫瘤細(xì)胞還原微環(huán)境中還原為JQ1，抑制誘導(dǎo)的PD-L1表達(dá)，改善獲得性免疫耐受。
 

艾博士：你們課題組的設(shè)計(jì)思路和機(jī)理我們有了一個(gè)大概的了解，其中有一個(gè)問題，您講到首先是證明了強(qiáng)力霉素（Doxy）具有抑制自噬相關(guān)基因的作用，那么你們是如何篩選自噬抑制劑的呢？

高晶：我們以三陰性乳腺癌為模型篩選了不同的自噬抑制劑，在體內(nèi)外水平均證實(shí)ATG4B蛋白（自噬小體的形成中間體）的抑制劑強(qiáng)力霉素可有效抑制自噬而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞表面MHC Ⅰ的表達(dá)（圖2a-2i）。另外，通過癌癥基因組圖譜（TCGA）TIMER數(shù)據(jù)庫分析可知ATG4B在癌癥組織中表達(dá)高于正常組織且其mRNA水平與CD8+T細(xì)胞的浸潤呈負(fù)相關(guān)（圖2j-2l），故該納米囊泡有望促進(jìn)免疫應(yīng)答而抑制腫瘤。
 

圖2. Doxy引發(fā)的腫瘤細(xì)胞免疫原性抑制自噬。

 

艾博士：抗腫瘤效果和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果如何？

高晶：我們?cè)诤奢d4T1乳腺癌的小鼠模型中證實(shí)了該納米囊泡的腫瘤抑制率高達(dá)90%且顯著延長小鼠生存期（圖3a-3d）。進(jìn)一步的機(jī)制探索證明免疫療效的顯著增強(qiáng)主要?dú)w因于腫瘤細(xì)胞表面MHCⅠ的表達(dá)增加，熟化的DC細(xì)胞比例增加從而提高腫瘤組織中CTLs的浸潤（圖3e-3n），且同時(shí)腫瘤細(xì)胞表面PD-L1的表達(dá)受到抑制。此外，強(qiáng)力霉素和IFNγ的聯(lián)合作用可進(jìn)一步擴(kuò)大免疫應(yīng)答，主要是由于MHC Ⅰ表達(dá)增加提高了CTLs的腫瘤浸潤，而CTLs分泌的IFN γ又可進(jìn)一步促進(jìn)MHC Ⅰ的表達(dá)（圖3o-q）。
 

圖3.納米囊泡在4T1荷瘤小鼠模型中的抗腫瘤療效。
 

此外，我們?cè)贐16-OVA模型中進(jìn)一步證實(shí)了該策略可通過增加腫瘤相關(guān)抗原呈遞以及抑制PD-L1的表達(dá)提高腫瘤免疫治療效果（圖4）。
 

圖4.納米囊泡在B16-OVA荷瘤小鼠模型中的抗腫瘤療效
 

艾博士：綜述可以看出，你們課題組的研究設(shè)計(jì)巧妙，抗腫瘤效果也很好，對(duì)于研究腫瘤免疫治療你們課題組的研究能給到大家什么啟發(fā)呢？

高晶：我們?cè)O(shè)計(jì)了一種新型可依賴腫瘤微環(huán)境激活的前藥納米囊泡，可抑制自噬和 PD-L1表達(dá)，以改善癌癥免疫治療。納米囊泡是用MMP-2可脫落PEG冠和CRGDK配體專門設(shè)計(jì)的，用于ATG4B和BRD4抑制劑（例如，Doxy和JQ1）的腫瘤特異性共遞送。在NIR-II熒光成像的引導(dǎo)下，納米囊泡實(shí)現(xiàn)了治療有效載荷在腫瘤部位的按需釋放，從而在避免不利副作用的同時(shí)最大限度地發(fā)揮治療作用。因此，協(xié)同腫瘤免疫微環(huán)境調(diào)節(jié)的當(dāng)前研究為克服癌癥免疫治療中的免疫抵抗提供了一種新策略。迄今為止，已有數(shù)十種基于脂質(zhì)體的藥物遞送平臺(tái)被批準(zhǔn)用于臨床癌癥治療。因此，新型前藥納米囊泡具有很高的臨床轉(zhuǎn)化潛力。

 

總之，基于自噬抑制與前藥組合的NIR-Ⅱ影像引導(dǎo)的靶向納米囊泡有望用于精準(zhǔn)調(diào)控腫瘤細(xì)胞表達(dá)MHC-I和降低PD-L1以克服腫瘤免疫耐受，是提高癌癥免疫療法的新策略。
 

艾博士：好的，非常感謝高晶老師的分享，相信大家對(duì)腫瘤免疫治療的難點(diǎn)以及該課題組精妙的設(shè)計(jì)有了更深入的了解。如果您想有更深入的了解，也非常歡迎您與該課題組進(jìn)行更細(xì)致深入的溝通交流。
 

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