微生物接種與分離方法
大多數(shù)細(xì)菌均可以通過人工方法培養(yǎng)，只有將微生物培養(yǎng)出來才能對它進(jìn)行研究、鑒定和應(yīng)用。根據(jù)待檢標(biāo)本的性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的種類，采用不同的接種方法。
1．平板劃線分離培養(yǎng)法
對混有多種細(xì)菌，采用劃線分離和培養(yǎng)，使原來混雜在一起的細(xì)菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個(gè)菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：
①分區(qū)劃線分離法：此法常用于含菌量較多的細(xì)菌的分離。先用接種環(huán)挑取標(biāo)本涂布于瓊脂平板1區(qū)（占培養(yǎng)基總面積的¼）并作數(shù)條劃線，再于2、3、4區(qū)依次劃線。每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)燒灼滅菌1次，冷后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃線均與上一區(qū)域的劃線交接1~3次。一個(gè)成功分區(qū)劃線的平板，培養(yǎng)后分別觀察1區(qū)形成菌苔，2區(qū)菌落連成線，3區(qū)和4區(qū)可分離到單個(gè)菌落。
②連續(xù)劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標(biāo)本或培養(yǎng)物中的細(xì)菌分離培養(yǎng)。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹，然后再用接種環(huán)或拭子在平板表面曲線連續(xù)劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。
2.瓊脂斜面接種法
主要用于菌落的移種，以獲得純種進(jìn)行鑒定和保存菌種等。用接種環(huán)（針）挑取單個(gè)菌落或培養(yǎng)物，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后再從底部沿直線向上曲折連續(xù)劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養(yǎng)基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細(xì)菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。
3．穿刺接種法
此法多用于半固體培養(yǎng)基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種，半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。接種時(shí)用接種針挑取菌落，由培養(yǎng)基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養(yǎng)基，穿刺高層部分，退出接種針后直接劃線接種斜面部分。
4．液體培養(yǎng)基接種法
用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。用接種環(huán)挑取單個(gè)菌落，傾斜液體培養(yǎng)管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立后液體淹沒接種物為準(zhǔn)）。此接種法應(yīng)避免接種環(huán)與液體過多接觸，更不應(yīng)在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實(shí)驗(yàn)室污染。
5．傾注平板法
本法主要用于飲水、飲料、牛乳等標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。取純培養(yǎng)物的稀釋或原標(biāo)本1ml至無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再將已融化并冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基15~20ml傾注入該無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，混勻，待凝固后置37℃培養(yǎng)，長出菌落后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，以求出每毫升標(biāo)本中所含菌數(shù)。先數(shù)6個(gè)方格（每格為1cm2）中菌落數(shù)，求出每格的平均菌落數(shù)，并算出平皿直徑，然后按下列公式計(jì)數(shù)，求出每毫升標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)。
全平板菌落數(shù)=每方格的平均菌落數(shù)×лr2
每ml標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)=全平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)
6．涂布接種法
本法多用于紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)的細(xì)菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養(yǎng)基表面，然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復(fù)涂布，使被接種液均勻分布于瓊脂表面，然后貼上藥敏紙片，或直接培養(yǎng)，本法經(jīng)培養(yǎng)后細(xì)菌形成菌苔。
1．平板劃線分離培養(yǎng)法
對混有多種細(xì)菌，采用劃線分離和培養(yǎng)，使原來混雜在一起的細(xì)菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個(gè)菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：
①分區(qū)劃線分離法：此法常用于含菌量較多的細(xì)菌的分離。先用接種環(huán)挑取標(biāo)本涂布于瓊脂平板1區(qū)（占培養(yǎng)基總面積的¼）并作數(shù)條劃線，再于2、3、4區(qū)依次劃線。每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)燒灼滅菌1次，冷后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃線均與上一區(qū)域的劃線交接1~3次。一個(gè)成功分區(qū)劃線的平板，培養(yǎng)后分別觀察1區(qū)形成菌苔，2區(qū)菌落連成線，3區(qū)和4區(qū)可分離到單個(gè)菌落。
②連續(xù)劃線分離法：此法常用于含菌量不多的標(biāo)本或培養(yǎng)物中的細(xì)菌分離培養(yǎng)。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹，然后再用接種環(huán)或拭子在平板表面曲線連續(xù)劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。
2.瓊脂斜面接種法
主要用于菌落的移種，以獲得純種進(jìn)行鑒定和保存菌種等。用接種環(huán)（針）挑取單個(gè)菌落或培養(yǎng)物，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線，然后再從底部沿直線向上曲折連續(xù)劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養(yǎng)基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細(xì)菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。
3．穿刺接種法
此法多用于半固體培養(yǎng)基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種，半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。接種時(shí)用接種針挑取菌落，由培養(yǎng)基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養(yǎng)基，穿刺高層部分，退出接種針后直接劃線接種斜面部分。
4．液體培養(yǎng)基接種法
用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。用接種環(huán)挑取單個(gè)菌落，傾斜液體培養(yǎng)管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立后液體淹沒接種物為準(zhǔn)）。此接種法應(yīng)避免接種環(huán)與液體過多接觸，更不應(yīng)在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實(shí)驗(yàn)室污染。
5．傾注平板法
本法主要用于飲水、飲料、牛乳等標(biāo)本中的細(xì)菌計(jì)數(shù)。取純培養(yǎng)物的稀釋或原標(biāo)本1ml至無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再將已融化并冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基15~20ml傾注入該無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，混勻，待凝固后置37℃培養(yǎng)，長出菌落后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，以求出每毫升標(biāo)本中所含菌數(shù)。先數(shù)6個(gè)方格（每格為1cm2）中菌落數(shù)，求出每格的平均菌落數(shù)，并算出平皿直徑，然后按下列公式計(jì)數(shù)，求出每毫升標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)。
全平板菌落數(shù)=每方格的平均菌落數(shù)×лr2
每ml標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)=全平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)
6．涂布接種法
本法多用于紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)的細(xì)菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養(yǎng)基表面，然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復(fù)涂布，使被接種液均勻分布于瓊脂表面，然后貼上藥敏紙片，或直接培養(yǎng)，本法經(jīng)培養(yǎng)后細(xì)菌形成菌苔。
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