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Label free非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組研究

瀏覽次數(shù):1100 發(fā)布日期:2021-7-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

定量蛋白質(zhì)組學(xué)是利用質(zhì)譜平臺(tái)檢測(cè)樣品中蛋白相對(duì)含量的分析化學(xué)技術(shù),非標(biāo)(Label free)蛋白質(zhì)組定量技術(shù)是一種不依賴于同位素標(biāo)記的蛋白質(zhì)定量技術(shù),該技術(shù)通過液質(zhì)聯(lián)用對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行檢測(cè),分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),對(duì)被檢測(cè)到的離子峰強(qiáng)度進(jìn)行積分,以積分面積進(jìn)行相對(duì)定量。

 

1.技術(shù)優(yōu)勢(shì)
 

  • 無需標(biāo)記,最大程度的保留樣本的真實(shí)性;
  • 處理步驟簡單,成本低;
  • 不受標(biāo)簽數(shù)量的限制,多個(gè)樣本可以同時(shí)進(jìn)行蛋白定量分析。

 

2.Label free 技術(shù)研究流程



 

3.技術(shù)參數(shù)

 

  • 樣本要求:

動(dòng)物及臨床組織標(biāo)本 100 mg/sample

血清、血漿 200μL/sample

細(xì)胞 、微生物 1×107 cells/sample

植物嫩葉、嫩芽 500mg/sample

植物種子、果實(shí) 100g/sample

 

  • 儲(chǔ)存和運(yùn)輸:

液氮或-80℃保存;足量干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

 

  • 檢測(cè)平臺(tái):

4.應(yīng)用方向

 

  • 臨床生物學(xué)及藥理學(xué)應(yīng)用方向

生物疾病標(biāo)志物研究;生物疾病發(fā)生發(fā)展過程分子機(jī)制研究;化學(xué)或生物藥物作用靶點(diǎn)研究;化學(xué)或生物藥物作用機(jī)理信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。

 

  • 農(nóng)林業(yè)等應(yīng)用方向

畜牧業(yè)領(lǐng)域:提高肉類品質(zhì)和飼養(yǎng)條件;農(nóng)業(yè)領(lǐng)域:農(nóng)作物發(fā)育機(jī)制的研究;食品科學(xué)領(lǐng)域:提高食品安全,改善口感和營養(yǎng)程度的研究;病毒領(lǐng)域:新型病毒抑制因子的挖掘研究。

 

5.案例分享

 

上皮蛋白質(zhì)組分析顯示干擾素誘導(dǎo)蛋白在過敏性鼻炎患者中的重要作用

Epithelial proteome profiling suggests the essential role of interferon-inducible proteins in patients with allergic rhinitis

 

季節(jié)過敏性鼻炎(SAR)是由間歇性接觸季節(jié)性花粉會(huì)引起鼻癢充血,反復(fù)打噴嚏,影響生活質(zhì)量、工作效率和學(xué)習(xí)成績。與過敏性鼻炎發(fā)病相關(guān)的分子基礎(chǔ)還不完全清楚。本文作者對(duì)29例SAR患者和31例對(duì)照組花粉季節(jié)期間和之后的受試者進(jìn)行了樣本收集,采用label free非標(biāo)定量蛋白組方法進(jìn)行了蛋白組研究,通過差異蛋白富集、pathway等生信分析以及WB驗(yàn)證,最終確定了1型干擾素調(diào)節(jié)蛋白作為SAR患者的生物標(biāo)志物,可能在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。此外,與SAR患者相比,健康受試者表現(xiàn)出跨季節(jié)的拮抗性蛋白質(zhì)組反應(yīng),這可能會(huì)成為疾病預(yù)防的治療靶點(diǎn)。

 

研究路線:

生信分析



 

部分應(yīng)用文獻(xiàn):

[1] Ndika Joseph,Airaksinen Liisa,Suojalehto Hille et al. Epithelial proteome profiling suggests the essential role of interferon-inducible proteins in patients with allergic rhinitis.[J] .J. Allergy Clin. Immunol., 2017, 140: 1288-1298.

[2] de Boer Bauke,Prick Janine,Pruis Maurien G et al. Prospective Isolation and Characterization of Genetically and Functionally Distinct AML Subclones.[J] .Cancer Cell, 2018, 34: 674-689.e8.

[3] Eckert Mark A,Coscia Fabian,Chryplewicz Agnieszka et al. Proteomics reveals NNMT as a master metabolic regulator of cancer-associated fibroblasts.[J] .Nature, 2019, 569: 723-728.

[4] Hammond Michael J,Nenarokova Anna,Butenko Anzhelika et al. A Uniquely Complex Mitochondrial Proteome from Euglena gracilis.[J] .Mol. Biol. Evol., 2020, 37: 2173-2191.

 

6.百趣協(xié)助客戶發(fā)表文獻(xiàn)

(可點(diǎn)擊標(biāo)題或圖片閱讀原文)

 

1. 高靜水壓力(HHP)對(duì)亞麻籽膠(PG)糖化大豆分離蛋白溶解度和構(gòu)象變化的影響



 

發(fā)表期刊:Food Chemistry

發(fā)表時(shí)間:2020

影響因子:6.306

作者單位:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)

涉及的百趣服務(wù)產(chǎn)品:Label free定量蛋白組學(xué)

樣本類型:大豆粉末

主要研究內(nèi)容:

大豆蛋白由于其具有較高的商業(yè)價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值,常被作為食品行業(yè)的配料或添加劑使用,現(xiàn)有的加工方法限制了大豆分離蛋白(SPI)在食品加工中的功能特性。文章使用label free定量蛋白組等方法研究了HHP對(duì)濕法加熱SPI和FG之間美拉德反應(yīng)的影響及SPI溶解度和構(gòu)象的變化。結(jié)果表明,與FG糖基化后SPI的溶解度提高。SPI-FG糖基化的發(fā)生、程度和位點(diǎn)表明,中等壓力(100 MPa)顯著促進(jìn)美拉德反應(yīng),而較高壓力(大于200 MPa)則抑制美拉德反應(yīng)?偟膩碚f,HHP代表了一種控制糖基化以改善蛋白質(zhì)加工性能并擴(kuò)大其在食品工業(yè)中的適用性的潛在方法。

 

2. 山奈酚預(yù)處理對(duì)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇誘導(dǎo)的Caco-2細(xì)胞腸道屏障功能障礙的保護(hù)作用機(jī)制研究



 

發(fā)表期刊:Food & Function

發(fā)表時(shí)間:2020

影響因子:4.171/中科院SCI期刊1區(qū)

作者單位:江南大學(xué)

涉及的百趣服務(wù)產(chǎn)品:Label free定量蛋白組學(xué)

樣本類型:細(xì)胞

主要研究內(nèi)容:

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)是食物鏈中常見的真菌毒素之一,有較多證據(jù)表明其對(duì)腸道穩(wěn)態(tài)的毒性有影響。山奈酚(KAM)是一種廣泛存在于水果和蔬菜中的天然多酚抗氧化劑,在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)KAM是防止DON暴露時(shí)Caco-2細(xì)胞單層屏障功能失調(diào)的最有效試劑。本文采用label free蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究了 KAM預(yù)處理對(duì)Caco-2細(xì)胞模型中由DON誘導(dǎo)的屏障功能障礙的保護(hù)作用,結(jié)果表明KAM預(yù)處理通過PKA通路和MAPK/ERK通路影響緊密連接和粘附連接蛋白的表達(dá)和組裝,從而提高Caco-2細(xì)胞單層屏障的完整性,為降低DON毒性效應(yīng)的策略的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)。

 

3. 褪黑激素提高油菜菌核病的抗性機(jī)制研究

Melatonin elevated Sclerotinia sclerotiorum resistance via modulation of ATP and glucosinolate biosynthesis in Brassica rapa ssp. pekinensis

發(fā)表期刊:Journal of Proteomics

發(fā)表時(shí)間:2021

影響因子:3.509

作者單位:浙江農(nóng)林大學(xué)

涉及的百趣服務(wù)產(chǎn)品:Label free定量蛋白組學(xué)、GC-TOF-MS代謝組學(xué)

樣本類型:葉片

主要研究內(nèi)容:

油菜菌核病是一種常見的油菜病害,由植物壞死病原菌核盤菌引起。褪黑激素(MT)具有已知的生物活性,能有效緩解油菜的這種菌核病。文章采用蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)研究MT誘導(dǎo)的油菜菌核病菌抗性的分子機(jī)制。結(jié)果表明,油菜葉片促進(jìn)硫胺素的形成,以抵御核盤菌感染。此外,金屬硫蛋白有助于以三磷酸腺苷依賴的方式進(jìn)一步誘導(dǎo)油菜中的抗氧化劑活化,并刺激谷胱甘肽生物合成以很好地抑制核盤菌感染。研究結(jié)果將為MT誘導(dǎo)的抗真菌機(jī)制提供見解,并為減輕這種疾病提供新的治療策略,從而提高植物產(chǎn)量,減少經(jīng)濟(jì)損失。

 

 

 

來源:上海百趣生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
聯(lián)系電話:021-61531195
E-mail:chengyichun@biotree.cn

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