2. 儀器部分

作者采用MRM正離子采集模式，結(jié)合超高效液相色譜與KinetexTM色譜柱分離條件，在13min色譜梯度下完成對生長素21個物質(zhì)的檢測，作者同時(shí)評估了方法的精密度和準(zhǔn)確度，方法精密度0.3-16.5%，方法準(zhǔn)確度-23.8-19.3%。具體色譜分離情況如下圖5：圖5 所有物質(zhì)色譜分離圖
 

2.方法驗(yàn)證

1. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

為了驗(yàn)證方法的有效性，作者通過評估3個野生型擬南芥（Col-0, Ws and Ler）和3個生長素高產(chǎn)變異型（35S:YUC1 ，sur1-3，sur2-1）中的生長素代謝物的水平，發(fā)現(xiàn)生長素高產(chǎn)株系sur1-3和sur2-1與Col-0株系相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在3個突變系中，iasp、IAGlu和oxIAA水平均顯著升高，表明IAA結(jié)合和IAA分解代謝均在這3個突變系中發(fā)生。IAA在根和芽的代謝模式與之前發(fā)表的野生型Col-0和IAA過度產(chǎn)生突變株的代謝模式一致，野生型和突變型的IAA水平也與先前報(bào)道的生長素高產(chǎn)突變株35S:YUC1 (Stepanova et al.， 2011)、sur1-3 (Boerjan et al.， 1995)和sur2-1 (Barlier et al.， 2000)的結(jié)果一致。具體結(jié)果如圖6：

圖6 擬南芥中生長素類物質(zhì)在野生型和突變型的代謝分析
 

2. 數(shù)據(jù)分析

為了結(jié)果可視化，作者做了基于PCA的biplots圖，如下圖7、8，結(jié)果顯示了三種生態(tài)型的根和芽有明顯的代謝物差異，組織之間差異性不明顯，同樣，在模型中，突變系是根據(jù)基因型而不是組織類型分離的；總的來說，該分析表明，代謝物數(shù)據(jù)的無監(jiān)督多變量建模是數(shù)據(jù)分析和可視化的重要輔助工具。綜上所述，誘導(dǎo)IAA高產(chǎn)突變株系對干擾植物的IAA代謝是非常有用的，可以作為更好地了解植物的代謝過程的一種途徑。

圖7 PCA圖（1）

圖8 PCA圖（2）
 

本篇文章作者開發(fā)了一種具有高靈敏度敏感和高選擇性的方法來對IAA及其前體和代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量，使得在少量的擬南芥組織中分析IAA代謝及其相關(guān)代謝物成為可能。通過對野生型和IAA高產(chǎn)株系的分析，結(jié)合多變量數(shù)據(jù)分析，驗(yàn)證了該方法，表明作者開發(fā)的技術(shù)有可能提供更深入了解生長素代謝是如何調(diào)控的。