克氏綜合征（Klinefelter syndrome）又稱先天性曲細(xì)精管發(fā)育不全綜合征，患者通常表現(xiàn)為男性第二性征發(fā)育遲緩和無精癥�；颊叩娜旧�體核型為47,XXY，即比正常男性多了一條X染色體（圖1），因此該病又被稱為XXY綜合征。大多數(shù)克氏綜合征患者是不育的，因此迫切需要了解如何預(yù)防和治療這種疾病。
 

圖1. 克氏綜合征患者及對(duì)照的核型。

額外的X染色體存在的原因是父母的生殖細(xì)胞在減數(shù)分裂形成精子和卵子的過程中，性染色體發(fā)生不分離現(xiàn)象所致。以往人們普遍認(rèn)為克氏綜合征的產(chǎn)生是隨機(jī)的，也有報(bào)道稱該病與母親年齡有關(guān)，但仍有約一半的克氏綜合征患者與父源因素相關(guān)。不過，這背后的分子機(jī)制在很大程度上仍然未知。

Usp26缺陷小鼠產(chǎn)生了XXY子代
為了研究父源疾病的遺傳基礎(chǔ)，研究人員對(duì)108例克氏綜合征患者開展了全外顯子組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)許多預(yù)測(cè)的有害突變都位于X染色體上。之后，USP26激發(fā)了他們的興趣。進(jìn)一步的分析表明，USP26在克氏綜合征患者中突變頻率最高，暗示USP26突變可能影響克氏綜合征的病因。

USP26屬于泛素特異性蛋白酶家族，可以去除底物中的泛素鏈。為了確定USP26突變是否會(huì)導(dǎo)致克氏綜合征子代，研究人員利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)構(gòu)建了Usp26基因敲除小鼠。Usp26位于X染色體上，因此這種Usp26敲除小鼠被稱為Usp26-/Y。他們發(fā)現(xiàn)，Usp26-/Y小鼠的生育力隨著年齡的增加而顯著降低，并產(chǎn)生了部分染色體核型為41,XXY的小鼠。

USP26參與性染色體配對(duì)
接下來，為了進(jìn)一步確定Usp26敲除的影響，他們分析了6個(gè)月大的Usp26-/Y小鼠的精子發(fā)生過程，發(fā)現(xiàn)Usp26-/Y小鼠的睪丸大小和重量顯著降低。部分小鼠的生精小管顯示結(jié)構(gòu)異常并具有大液泡和凋亡細(xì)胞。此外，6個(gè)月大Usp26-/Y小鼠的精子總數(shù)減少。這些結(jié)果表明，Usp26的破壞在一定程度上損害了精子發(fā)生。

之后，研究人員通過免疫染色來鑒定USP26在精子發(fā)生過程中的精確定位，發(fā)現(xiàn)它在粗線期與聯(lián)會(huì)的染色體軸一起出現(xiàn)，表明USP26參與了性染色體重組和聯(lián)會(huì)。他們對(duì)6個(gè)月大Usp26-/Y小鼠精母細(xì)胞中的X和Y染色體進(jìn)行FISH分析，發(fā)現(xiàn)大約40%的性染色體未配對(duì)，而野生型精母細(xì)胞中只有2%未配對(duì)。這些結(jié)果支持了USP26對(duì)于性染色體的聯(lián)會(huì)是必不可少的。

由于USP26定位在XY body區(qū)域，故研究人員推測(cè)其可能會(huì)調(diào)節(jié)聯(lián)會(huì)復(fù)合體相關(guān)蛋白TEX11的穩(wěn)定性。他們證實(shí)，這兩種蛋白質(zhì)確實(shí)存在相互作用，而且USP26可以對(duì)TEX11進(jìn)行去泛素化。Usp26-/Y睪丸中的TEX11水平顯著降低，支持了USP26介導(dǎo)的去泛素化促進(jìn)了TEX11的穩(wěn)定性。Usp26敲除后TEX11水平降低，導(dǎo)致性染色體無法正常配對(duì)聯(lián)合（Usp26敲除小鼠（2664bp）和Tex11敲除小鼠由賽業(yè)生物構(gòu)建）。

未配對(duì)的性染色體可能會(huì)導(dǎo)致第一次減數(shù)分裂中期的錯(cuò)誤分離。從理論上說，如果性染色體在第一次減數(shù)分裂時(shí)隨機(jī)分離，則精子將出現(xiàn)25%的X、Y、XY和O精子分布。他們發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，6個(gè)月大Usp26-/Y小鼠產(chǎn)生XY和O非整倍體圓形精子細(xì)胞的比例明顯更高，而且XY非整倍體精子的比例也更高。

研究人員指出，以上這些結(jié)果表明Usp26的破壞會(huì)影響第一次減數(shù)分裂，而Usp26的功能破壞會(huì)擾亂性染色體配對(duì)，導(dǎo)致它們?cè)诘谝淮螠p數(shù)分裂中期的錯(cuò)誤分離，產(chǎn)生XY非整倍體精子，進(jìn)而導(dǎo)致41,XXY子代的產(chǎn)生（圖2）。
 

圖2. Usp26的破壞產(chǎn)生XY非整倍體精子，并導(dǎo)致41,XXY子代的產(chǎn)生。

USP26變異對(duì)男性精子形成的影響
從小鼠研究推斷，攜帶USP26變異的男性應(yīng)該可以生育，但產(chǎn)生XY非整倍體精子的風(fēng)險(xiǎn)更高。因此，研究人員對(duì)正�？捎�男性的精子進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)攜帶UPS26變異的男性存在更高比例的XY非整倍體精子，清楚表明這些父源USP26變異會(huì)增加子代的克氏綜合征風(fēng)險(xiǎn)。

之后，他們確定了兩個(gè)家族，其中克氏綜合征患者的父親帶有USP26突變的單倍型，而患者母親在USP26編碼區(qū)內(nèi)不含有突變。進(jìn)一步的短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）多態(tài)性連鎖分析也證實(shí)了患者額外的X染色體來自其父親（圖3）。這些結(jié)果進(jìn)一步支持了父源USP26突變可導(dǎo)致子代患上克氏綜合征。
 

圖3. 帶有USP26突變的男性產(chǎn)生了XY非整倍體精子。

小結(jié)
這項(xiàng)研究首次發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了父源USP26相關(guān)突變可增加子代的克氏綜合征風(fēng)險(xiǎn)。它打破了以往克氏綜合癥隨機(jī)產(chǎn)生的觀點(diǎn)，為克氏綜合征的產(chǎn)生機(jī)制提供了一個(gè)全新視角，并有望帶來新的診斷和治療靶點(diǎn)以及預(yù)防干預(yù)策略。

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原文檢索：

Liu C, Liu H, Zhang H, Wang L, Li M, Cai F, Wang X, Wang L, Zhang R, Yang S, Liu W, Liang Y, Wang L, Song X, Su S, Gao H, Jiang J, Li J, Luo M, Gao F, Chen Q, Li W, Chen ZJ. Paternal USP26 mutations raise Klinefelter syndrome risk in the offspring of mice and humans. EMBO J. 2021 May 12:e106864. doi: 10.15252/embj.2020106864. Epub ahead of print. PMID: 33978233.