同為科研打工人,熬過的夜、繞過的彎、入過的坑、踩過的雷,小艾不說你肯定秒懂,科研路漫漫,小艾與你來作伴。若干年前,作為一名剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的小菜鳥,就是從做IF開始啟蒙的。看了一下師姐的實(shí)驗(yàn)記錄文檔,那叫一個(gè)漂亮:
這樣的
這樣的
這樣的
。。。。。。
興致勃勃的開始,一籌莫展的結(jié)局,我的是這樣的
明明是按照同款操作步驟進(jìn)行的,誰能給我一個(gè)解釋,看著師姐忙碌的身影,我也不敢說,我也不敢問啊!弱小又無助,好在有位好心腸的師姐:
“你看下是不是細(xì)胞通透的時(shí)間不夠,還是因?yàn)椴僮鞑皇煜ぷ詈笮盘?hào)淬滅了,文檔里的實(shí)驗(yàn)方法是好久之前的,一直沒有更新。之前我們也都是摸索好幾次,配的甘油進(jìn)行封片的,但是效果時(shí)好時(shí)壞,好在后來直接用了現(xiàn)成的封片劑。。。。!弊哌^的彎路再走幾次很可能還是彎的,但是師姐一句話就把它捋直了!
其實(shí)其他的倒沒什么,不過“現(xiàn)成的”這三個(gè)字甚合我意!
沒錯(cuò),就是這款現(xiàn)成的Fluoromount-G®封片劑,無需復(fù)雜有機(jī)溶劑溶解和孵育步驟,只需滴加一滴,就可以輕易解決從即時(shí)觀察、短期觀測(cè)到長期保存的所有問題,助你輕松get一張精美的免疫熒光圖片。不僅可封片,還能防猝滅~
熒光猝滅:熒光素由內(nèi)部因素和外部因素同時(shí)作用引起的不可逆破壞,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低或喪失的現(xiàn)象。內(nèi)部因素主要是分子從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)以非輻射躍遷形式釋放能量,外部因素主要因熒光分子在激發(fā)光照射下,歷經(jīng)多次激發(fā)/發(fā)射過程,導(dǎo)致分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生不可逆變化,從而使其無法吸收更多光子,影響熒光的進(jìn)一步發(fā)射,即分子的光漂白(Photobleaching)。另外,當(dāng)激發(fā)光功率過高,熒光分子也可能被漂白,造成熒光淬滅現(xiàn)象。
Fluoromount-G是一種水溶性、非熒光性化合物,用來對(duì)最后一步染色為水溶液體系的玻片樣本進(jìn)行封片,可以明顯降低熒光顯微鏡下玻片樣本分析中的熒光淬滅現(xiàn)象。而且,還可以提供含有細(xì)胞核探針DAPI形式的Fluoromount-G,可同時(shí)實(shí)現(xiàn)復(fù)染和封片,實(shí)用性更高。
Fluoromount-G熒光封片劑特點(diǎn):
1.經(jīng)典的水溶性抗熒光淬滅封片劑,數(shù)千篇應(yīng)用文獻(xiàn),被外各大實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可;
2.與絕大多數(shù)熒光素兼容,包括FITC,PE,APC,Texas Red,羅丹明等,防止熒光淬滅;
3.操作其簡單,只需滴加一滴即可實(shí)現(xiàn)封片;
4.光學(xué)透明,封片后光折射率佳;
5.封片后可實(shí)現(xiàn)樣本低溫長久保存;
6.穩(wěn)定性高,室溫運(yùn)輸和保存即可;
7.兩種供貨形式:不含細(xì)胞核探針(cat#0100-01);含細(xì)胞核探針DAPI(cat#0100-01);后者可同時(shí)實(shí)現(xiàn)復(fù)染和封片,實(shí)用性更高
※ 貼壁細(xì)胞樣品
染色完畢后,吸盡液體。
滴一滴(~50μl)封片液于載玻片上,蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片,讓細(xì)胞接觸封片液,盡量避免氣泡。
隨后即可通過熒光顯微鏡觀察樣品。
※ 組織切片
染色完畢后,吸盡液體。
滴一滴(~50μl)封片液于組織切片上,蓋上蓋玻片,讓切片接觸封片液,盡量避免氣泡。
隨后即可通過熒光顯微鏡觀察樣品。
看到這有沒有覺得你離一張精美的免疫熒光圖只差一滴Fluoromount-G®熒光封片液的距離!
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