前情回顧：

 

       生物素標(biāo)記工具

 

       鏈霉親和素標(biāo)工具

 

       熒光蛋白標(biāo)記工具

 

       熒光染料標(biāo)記的肽和寡核苷酸是生化和細(xì)胞研究中的重要工具，目前熒光肽和寡核苷酸已廣泛用于所有主要類型的熒光成像中，包括熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET），這些標(biāo)記的生物分子被廣泛用于基于分子信標(biāo)和其他技術(shù)的傳染病診斷。FRET肽和寡核苷酸也已通過熒光相關(guān)細(xì)胞分選（FACS）用于細(xì)胞分析，用于體內(nèi)或體外的研究和診斷目的。

 

       肽和蛋白質(zhì)分子量計(jì)算器：

 

       為了幫助您計(jì)算寡肽和蛋白的分子量，請使用我們的在線計(jì)算器，肽和蛋白質(zhì)分子量計(jì)算器：https://www.aatbio.com/tools/calculate-peptide-and-protein-molecular-weight-mw

 

       用于熒光標(biāo)記染料

 

       根據(jù)肽/寡核苷酸的序列，可以通過共價鍵將熒光染料在特定點(diǎn)連接至肽/寡核苷酸。染料和肽/寡核苷酸之間的連接是共價鍵，在大多數(shù)生物學(xué)條件下較穩(wěn)定且不會被破壞。在某些情況下，在染料和肽/寡核苷酸之間引入功能性接頭來使肽/寡核苷酸生物活性改變最小，對于所有的肽/寡核苷酸標(biāo)記，染料都必須連接在確定的位置。通常，優(yōu)選的熒光標(biāo)記應(yīng)具有高的熒光量子產(chǎn)率并保留未標(biāo)記生物分子的生物學(xué)活性。

 

v我們?yōu)榇蠹姨峁┝硕喾N類型熒光標(biāo)記染料，便于染料與用于生物學(xué)研究的肽/寡核苷酸的結(jié)合，這些熒光染料包括香豆素，熒光素，羅丹明和花青素，其中，我們的Tide Fluor™，California Red™，SunRed™和Helix Fluor™染料經(jīng)過優(yōu)化，可標(biāo)記肽和寡核苷酸。

 

       花青素染料家族和其他經(jīng)典染料

 

 

       圖1.將 HeLa細(xì)胞與tubulin抗體孵育，然后與Cy5®山羊抗小鼠IgG偶聯(lián)物（紅色）一起孵育。細(xì)胞核用Hoechst 33342（藍(lán)色，Cat# 17530）染色。

 

       盡管現(xiàn)代染料（例如iFluor™染料）通常用于更具挑戰(zhàn)性的生物學(xué)應(yīng)用，但經(jīng)典的熒光標(biāo)記染料有時因其較低的成本而非常適用于某些要求不高的應(yīng)用。在經(jīng)典的標(biāo)記染料中，cyanines是最受歡迎的選擇之一，其他染料包括FAM，TAMRA和TexasRed®，也都可以用于偶聯(lián)肽和寡核苷酸。

 

       花青素染料家族和其他用于熒光標(biāo)記染料的經(jīng)典染料：

 

花青染料	激光	Ex / Em（nm）	濾光片組	消光系數(shù)（ε）	量子產(chǎn)率（Φ）
Cy3	532 nm	554/568 nm	Cy3 / TRITC	150,000	0.15
Cy5	633-647 nm	650/669 nm	Cy5	250,000	0.27
Cy7	730 nm	754/778 nm	Cy7	250,000	0.3

 

Tide Fluor™系列染料

 

Tide Fluor™染料經(jīng)過優(yōu)化，可作為開發(fā)FRET寡核苷酸和肽的基礎(chǔ)，我們的Tide Fluor™染料比香豆素，熒光素，羅丹明和花青素等經(jīng)典標(biāo)記染料具有更強(qiáng)的熒光，更高的光穩(wěn)定性。

 

 

       用于熒光標(biāo)記的Tide Fluor™系列染料：
 

貼標(biāo)染料	Ex（nm）	Em（nm）	消光系數(shù)（ε）	量子產(chǎn)率	CF260	CF280
Tide Fluor™1	345	442	20000	0.95	0.246	0.187
Tide Fluor™2WS	502	525	75000	0.9	0.211	0.091
Tide Fluor™2	500	527	75000	0.9	0.288	0.201
Tide Fluor™3WS	555	565	150000	0.105	0.079	0.079
Tide Fluor™3	555	584	85000	0.85	0.331	0.201
Tide Fluor™4	590	618	90000	0.91	0.489	0.436
Tide Fluor™5WS	649	664	250000	0.25	0.023	0.027
Tide Fluor™6WS	676	695	220000	0.18	0.111	0.009
Tide Fluor™7WS	749	775	275000	0.12	0.009	0.049
Tide Fluor™8WS	775	807	250000	0.08	0.103	0.109

 

       CF260是染料在260 nm處的校正因子，用于消除染料對260 nm處的吸光度的影響（用于寡核苷酸和核酸標(biāo)記）

 

       CF280是染料280 nm處的校正因子，用于消除染料對280 nm處的吸光度的影響（用于肽和蛋白質(zhì)標(biāo)記）

 

       其他系列染料

 

       我們的California Red™，Sunnyvale Red™和Helix Fluor™染料非常適合對寡核苷酸和肽進(jìn)行強(qiáng)大，高效的標(biāo)記。這些系列具有改進(jìn)的性能和亮度，仍然與傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記染料（例如FAM，TET，VIC，JOE，NED，TAMRA和ROX）檢測平臺兼容。

 

       其他熒光標(biāo)記系列染料：

 

貨號	產(chǎn)品名稱	Ex（nm）	Em（nm）	規(guī)格
250	Helix Fluor™545，琥珀酰亞胺酯	525	545	1mg
251	Helix Fluor™575，琥珀酰亞胺酯	546	575	1mg
394	Sunnyvale Red™SE *替代6-ROX *	576	605	5mg
473	California Red™ SE	583	603	5mg
479	California Red™ SE	583	603	1mg

 

       不用于熒光標(biāo)記的染料

 

       蛋白酶參與許多生理過程， 蛋白酶的檢測和特定蛋白酶抑制劑的篩選對于發(fā)現(xiàn)用于治療和管理蛋白酶相關(guān)疾病的潛在藥物至關(guān)重要，各種供體和受體分子（熒光的或非熒光的）附著在肽/蛋白質(zhì)上（形成內(nèi)部淬滅的結(jié)合物），并根據(jù)氨基酸序列用于檢測蛋白酶。精心選擇供體和受體分子，使受體的激發(fā)波長與供體發(fā)射波長重疊，從而確保熒光通過共振能量轉(zhuǎn)移而淬滅，底物的酶水解導(dǎo)致供體和受體分子的空間分離，從而恢復(fù)供體熒光。

 

       FRET原理

 

       熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是一種物理現(xiàn)象，在生物醫(yī)學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中已經(jīng)越來越流行。FRET是能量從供體分子（donor）到受體分子（acceptor）的無熱量傳輸。供體分子是最初吸收能量的熒光基團(tuán)，而受體是隨后轉(zhuǎn)移能量的熒光基團(tuán)，這種共振相互作用發(fā)生在大于原子間的距離上，而沒有轉(zhuǎn)化為熱能并且沒有任何分子碰撞。能量轉(zhuǎn)移導(dǎo)致供體的熒光強(qiáng)度和激發(fā)態(tài)壽命的減少，以及受體的發(fā)射強(qiáng)度的增加。以發(fā)生FRET的方式相互作用的一對分子通常稱為供體/受體對。由于它對距離敏感，F(xiàn)RET被用于觀察分子間相互作用。

 

       圖2. 從供體到受體分子的FRET過程圖。水平線代表每個分子的離散電子能級。能級被標(biāo)記為單峰態(tài)（S）或三重態(tài)（T），其下標(biāo)分別為0，1或2（分別代表基態(tài)，第一激發(fā)態(tài)或第二激發(fā)態(tài)）。分子的電子通常處于基態(tài)S0。電子可以通過許多過程被激發(fā)到更高的能級，包括光吸收和化學(xué)反應(yīng)。

 

       盡管有很多影響FRET的因素，但要使FRET發(fā)生需要滿足的主要條件相對較少：

 

       供體和受體分子必須彼此接近（通常為10-100Å）

       受體的激發(fā)光譜必須與供體的發(fā)射光譜重疊。它們重疊的程度稱為光譜重疊積分（J）

       供體和受體過渡偶極的方向必須近似平行

 

       假設(shè)供體受體對是相匹配的，發(fā)生FRET所必需的最關(guān)鍵元素是供體受體對之間的緊密接近。Förster證明了過程（E）的效率取決于供體與受體之間距離的六次方的倒數(shù)，如以下等式所示：

 

E = R o 6 /（R o 6 + r 6）

 

       其中Ro是能量傳遞一半時的Förster距離，r是供體與受體之間的實(shí)際距離。Ro的大小取決于體與受體的光譜性質(zhì)。Förster距離在20到90Å之間時，對研究生物大分子最有用。

 

       Tide Quencher™系列

 

       盡管DABCYL已被用于開發(fā)各種FRET應(yīng)用，但對于較長波長的染料（例如熒光素，羅丹明和花青素）的淬滅效率較低，限制了其在敏感的熒光FRET探針開發(fā)中的應(yīng)用。另外，DABCYL的吸收光譜對環(huán)境敏感。我們已開發(fā)出耐用的Tide Quencher™受體染料，用于研發(fā)更長波長的FRET探針，Tide Quencher™染料是消除經(jīng)典淬滅劑限制的絕佳選擇。

 

 

       Tide Quencher™染料的主要優(yōu)點(diǎn)：

 

       探索其他淬滅劑可能無法實(shí)現(xiàn)的FRET潛力

       多種反應(yīng)形式便于自我構(gòu)建所需的FRET生物分子

       與您所需的熒光供體完全匹配

       性價比高

 

       Tide Quencher™系列產(chǎn)品：

 

淬滅劑	激發(fā)（nm）	消光系數(shù)（ε）	CF260	CF280
Tide Quencher™1	488	20,000	0.147	0.194
Tide Quencher™2	512	21,000	0.100	0.120
Tide Quencher™2WS	515	21,000	0.100	0.120
Tide Quencher™3	576	22,000	0.085	0.091
Tide Quencher™3WS	576	90,000	0.186	0.205
Tide Quencher™4	604	23,000	0.146	0.183
Tide Quencher™4WS	604	90,000	0.149	0.136
Tide Quencher™5	661	24,000	0.170	0.082
Tide Quencher™5WS	661	130,000	0.072	0.082
Tide Quencher™6WS	691	130,000	0.120	0.102

 

       CF260是染料在260 nm處的校正因子，用于消除染料對260 nm處的吸光度的影響（用于寡核苷酸和核酸標(biāo)記）

 

       CF280是染料280 nm處的校正因子，用于消除染料對280 nm處的吸光度的影響（用于肽和蛋白質(zhì)標(biāo)記）

 

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