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高靈敏度DNA和RNA定量試劑測定與UV吸收率測定方法的效果對比

瀏覽次數:1524 發(fā)布日期:2020-6-24  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
高核酸親和力的DNA和RNA試劑

DNA編碼所有遺傳信息,是創(chuàng)造所有生物生命的藍圖。它充當遺傳物質在世代之間傳遞的存儲設備,RNA充當DNA中存儲的藍圖的讀取器。儲存在DNA中的遺傳信息由RNA攜帶,在核糖體形成蛋白質的過程中充當信使。這整個過程稱為分子生物學的“中心教條”。由于核酸分析的范圍繼續(xù)擴大,在核酸檢測方法的選擇上也是五花八門。影響檢測方法選擇的關鍵因素包括穩(wěn)定性、靈敏度、速度和方便性,以及檢測試劑和檢測系統(tǒng)的總成本。核酸超靈敏分析的原因包括單細胞和稀有細胞的遺傳物質分析,如母體循環(huán)中的滋養(yǎng)細胞,以及單拷貝基因檢測。此外,更好的檢測方法可以提供一種需要較少擴增周期的分析途徑,或者消除核酸擴增反應的多周期方案(例如,PCR)。盡管許多檢測技術,如基于化學發(fā)光的檢測技術,在未來可能會發(fā)揮重要作用,但目前熒光技術仍然是核酸分析中應用最廣泛的檢測技術。


 

DNA和RNA定量試劑

Helixyte 綠色dsDNA定量試劑(Cat#17597)和StrandBrite 綠色RNA定量試劑(Cat#17611)分別對雙鏈DNA和單鏈RNA進行了優(yōu)化。它們對核酸有很高的親和力,對結合核酸有極大的熒光增強作用,使得在幾分鐘內直接檢測復雜溶液中微量核酸成為可能,而且一般不會受到其他生物分子的干擾。

 

圖1.小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen  具有幾乎相同的性能。

Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑,與dsDNA結合后可顯著增強熒光。它具有與PicoGreen®相同的光譜特性,因此是PicoGreen®的絕佳替代品(PicoGreen®是Invitrogen的商標)。它是可用于定量溶液中DNA的最敏感的染色劑之一。使用Helixyte Green,您可以在ssDNA,RNA和游離核苷酸存在的情況下選擇性地檢測低至25 pg / ml的dsDNA。該測定法在三個數量級上是線性的,并且?guī)缀鯖]有序列依賴性,使您能夠準確地測量來自多種來源的DNA,包括基因組DNA,病毒DNA,微量制備DNA或PCR擴增產物。

在進行Northern雜交分析、S1核酸酶分析、RNase保護分析、cDNA文庫制備、反轉錄PCR之前,檢測和定量少量RNA對于多種分子生物學過程非常重要,例如測量體外轉錄RNA的產量和測量RNA濃度。測量核酸濃度最常用的技術是在260nm處測定吸光度,吸光度法的主要缺點是蛋白質、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物的干擾,但使用敏感的熒光核酸試劑可以緩解這種干擾問題。StrandBrite RNA定量試劑是一種用于溶液中RNA定量的超靈敏熒光核酸染料。StrandBrite RNA定量試劑可以用熒光酶標儀或熒光分析儀檢測到低至5ng/mL的RNA。

Helixyte 綠色 dsDNA和StrandBrite 綠色 RNA定量試劑的優(yōu)勢:

  • 高靈敏度:Helixyte 綠色和StrandBrite 綠色的靈敏度比UV吸收率測定法高10,000倍。
  • 選擇性高:與紫外吸收的測量不同,這些檢測不受蛋白質,游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響,從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復雜混合物(例如血清或全血)中更加準確。
  • 操作簡單:這些檢測方法非常簡單,不需要分離步驟,因此非常適合自動化,高通量篩選。
  • 檢測范圍廣:對于Helixyte 綠色的檢測,定量在四個數量級內都是準確的;赟trandBrite 的熒光檢測在三個數量級上都是準確的。

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