Fluidic Analytics公司總部位于英國(guó)劍橋，致力于為實(shí)驗(yàn)室、診所和其他用戶提供蛋白質(zhì)研究的創(chuàng)新儀器、軟件和服務(wù)。目前Fluidic Analytics在歐洲、北美和亞洲有分公司和合作伙伴，并積極尋找新的合作伙伴。

Fluidity One-W是Fluidic Analytics公司開發(fā)的第二款產(chǎn)品，于2019年11月18日發(fā)布。這款產(chǎn)品基于劍橋大學(xué)開發(fā)的全新技術(shù)平臺(tái)，使科學(xué)家能夠在溶液中、在天然狀態(tài)下分析蛋白質(zhì)的相互作用，不需要通過結(jié)合表面的固定。這也是開發(fā)這款產(chǎn)品的初衷，需要表面固定的檢測(cè)方法存在非特異性結(jié)合等干擾，并且真實(shí)的相互作用并非發(fā)生在固定表面，而是在溶液中。研究者們想尋求一種能在更接近真實(shí)的背景下分析相互作用的方法。Fluidity One-W可用于分析蛋白質(zhì)的相互作用以及蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)合比例，能夠?yàn)榧膊≡\斷、治療開發(fā)和個(gè)人健康領(lǐng)域的研究提供很大的幫助。

檢測(cè)原理

（1）含有蛋白質(zhì)樣品的液流被引入到旁邊的輔助流，蛋白質(zhì)液流和輔助流是平行流動(dòng)的，因?yàn)闆]有對(duì)流混合，蛋白質(zhì)遷移到輔助流的唯一方式是擴(kuò)散。

 

（2）從左右的對(duì)比中，可以看到擴(kuò)散的速度取決于蛋白質(zhì)的大小。分子量小的蛋白擴(kuò)散快，分子量大的蛋白擴(kuò)散慢。

 

 

（3）標(biāo)記過的樣品A和未標(biāo)記的B混合，A、B結(jié)合而成的AB分子量大于A，于是擴(kuò)散變慢。測(cè)定擴(kuò)散和未擴(kuò)散液流中A的數(shù)量，結(jié)合兩者的比值計(jì)算出流體動(dòng)力學(xué)半徑（R_h）。A結(jié)合的比例越高，R_h越大。

 

 

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（4）只有被標(biāo)記的樣品才能被檢測(cè)到，因此Fluidity One-W可以檢測(cè)緩沖液、細(xì)胞裂解液或其他生物原液中的蛋白質(zhì)，雜質(zhì)不會(huì)影響測(cè)得的流體動(dòng)力學(xué)半徑。

 

典型應(yīng)用

分析復(fù)雜背景中蛋白質(zhì)的相互作用

研究混合物諸如細(xì)胞裂解液或血漿中蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)-DNA和蛋白質(zhì)-脂質(zhì)的相互作用。非表面結(jié)合的原理避免了非特異性結(jié)合的干擾風(fēng)險(xiǎn)，因此您研究的是接近天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)。

 

 

比較在0.05% 吐溫 20 (PBS-T)磷酸鹽緩沖液和FreeStyle™293培養(yǎng)基中，A蛋白 (SpA)與免疫球蛋白G (IgG)抗體的相互作用。結(jié)果表明，在兩種溶液中的結(jié)合親和力和流體動(dòng)力學(xué)半徑均無顯著差異。

絲氨酸蛋白酶凝血酶與兩個(gè)預(yù)先標(biāo)記的抗凝血酶配體HD22和TBA進(jìn)行了測(cè)定。每個(gè)配體與凝血酶的不同表位相結(jié)合；這些相互作用先前已經(jīng)被很好地描述過了。每個(gè)配體-蛋白復(fù)合物的結(jié)合親和力，以及復(fù)合物和配體的流體動(dòng)力學(xué)半徑，都符合之前研究報(bào)告得到的數(shù)值。

研究分析難度大的蛋白質(zhì)

雷帕霉素（Rapamycin）是一種大環(huán)內(nèi)酯物化合物，可用于包被冠狀動(dòng)脈支架, 防止器官移植排斥反應(yīng)，可能也適用于抗癌治療，對(duì)人體具有免疫抑制作用。這些功能的關(guān)鍵在于它能夠同時(shí)結(jié)合兩個(gè)不同的蛋白質(zhì)。雷帕霉素可與FKBP12和FRB同時(shí)結(jié)合。

無雷帕霉素（20 nM FKBP12-FITC + 1000 nM FRB）作為對(duì)照組。

FKBP12-FITC的濃度固定在20 nM。

雷帕霉素的濃度固定在50 nM。

用不同濃度的FRB測(cè)定FKBP12與FRB和雷帕霉素的結(jié)合。

 

測(cè)定化學(xué)計(jì)量學(xué)和結(jié)構(gòu)

蛋白質(zhì)大小的測(cè)量讓您可以深入了解蛋白質(zhì)及其復(fù)合物的結(jié)構(gòu)（結(jié)合比例）和化學(xué)計(jì)量學(xué)。

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模型模擬了以1:1、1:2和1:3的比例結(jié)合的SpA-IgG復(fù)合物。紅色帶狀物代表SpA，藍(lán)色帶狀物代表IgG。用模型計(jì)算了三種比例結(jié)合物的 R_h 假設(shè)值(紅色條形)。將Fluidity One-W測(cè)得的 R_h平均值(藍(lán)色條形)與這些假設(shè)值做比較。紅色條形上添加了R_h預(yù)測(cè)值的10%作為誤差范圍，以表示模型中的最小不確定性。可以看到Fluidity One-W的測(cè)量值與1:3結(jié)合比例的SpA-IgG復(fù)合物的R_h 假設(shè)值相符。

產(chǎn)品特點(diǎn)

在溶液中檢測(cè)，樣品無需表面固定，是在自然狀態(tài)或接近自然狀態(tài)下的檢測(cè)方式，可以減少基于表面原理的非特異性結(jié)合現(xiàn)象
適用于各種類型的樣品，像細(xì)胞裂解液和血清等成分復(fù)雜的原液也無需純化，減少樣品純化的工作樣品量小，僅5 µL
可用于分析結(jié)合時(shí)的化學(xué)計(jì)量數(shù)，推測(cè)蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)合比例
流體動(dòng)力學(xué)半徑的變化和分子量的改變關(guān)系密切，可以反映蛋白質(zhì)是否降解（穩(wěn)定性），或進(jìn)行品質(zhì)控制
高再現(xiàn)性和精確度
易于使用的操作界面​
 

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