夏天，最怕聽到“熱”這個字！有沒有人跟小編一樣，一聽，就熱？

 

 

       所幸，最近一節(jié)段還是炎夏來臨前的雨季，全國范圍內(nèi)還是比較涼爽的，對于怕熱的人生，再來一塊清涼的“冰心”，才最爽！

 

 

       可見溫度對生活的影響有多大，炎炎夏日，空調(diào)開高一度和低一度，有時候后就是天(da)差(han)地(lin)別(li).

 

       對于溫度異常敏感的PCR實驗，更是如此！

 

       每次PCR實驗都要到處找冰盒，鏟冰…… 各種怕溫度敏感的酶在小小的PCR小管里發(fā)生不該發(fā)生的story，比如非特異擴(kuò)增，悄悄地合成引物二聚體等，最后P出來各種條帶，我們就要cry了。

 

       那么，如果我們使用了熱啟動DNA聚合酶，故事就不一樣了。經(jīng)過化學(xué)修飾的TaqDNA聚合酶，對溫度“炒雞”穩(wěn)定，PCR加樣再也不需要到處找冰盒鏟冰，小心翼翼的忐忑了。HoT FIREPol®熱啟動DNA酶常溫穩(wěn)定一個月，只有溫度達(dá)到95℃才會被激活。所以我們再也不必?fù)?dān)心加樣的過程以及升溫之前，PCR就開始反應(yīng)，合成不需要的片段。做到隨意PCR 如吃瓜！

 

 

       好啦，言歸正傳，吃瓜的同時，我們來點專業(yè)解釋：

 

       在傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)中，反應(yīng)體系各成分（Taq DNA聚合酶、dNTP 和引物等）均是一次加入并進(jìn)入循環(huán)，在反應(yīng)溫度由室溫（25℃）上升至高溫（94～95℃）過程中，可能發(fā)生引物錯配和二聚體的形成。引物與模板中一些非靶位點的錯配和引物之間形成的二聚體，在Taq酶的作用下均可延伸，這些非特異性產(chǎn)物又可以在后面的PCR循環(huán)中繼續(xù)擴(kuò)增，使非特異性產(chǎn)物不斷積累，同時，也消耗反應(yīng)體系的各成分，最終PCR擴(kuò)增的特異性產(chǎn)物大大減少。熱啟動PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在樣品溫度至少超過70℃時才發(fā)揮作用的PCR。通過這種方式控制PCR反應(yīng)的必須組分DNA聚合酶，直到反應(yīng)混合物被加熱到可以阻止非特異引導(dǎo)和引物聚合的溫度后，再啟動PCR達(dá)到有效擴(kuò)增特異性PCR產(chǎn)物的目的。

 

       熱啟動PCR循環(huán)是這樣的，為了充分激活酶，比普通PCR增加了熱激活步驟。

 

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)
起始熱激活	95℃	12-15min	1
變性	95℃	15-30s	26-35
退貨	50-68℃	30-60s
延伸	72℃	1-4min
終末延伸	72℃	5-10miin	1

       PCR的靈魂—熱啟動DNA聚合酶

 

       與TaqDNA酶不同，熱啟動DNA聚合酶是經(jīng)過化學(xué)修飾的Taq酶，常溫操作時其沒有活性，只有高溫才能激活酶，可以避免低溫或者常溫操作時非特異性擴(kuò)增以及引物二聚體的產(chǎn)生。這款Solis 熱啟動 FIREPol DNA 聚合酶更靈敏，特異性更強(qiáng)，可以常溫操作，常溫穩(wěn)定1個月。同時，PCR產(chǎn)物可以無憂做下游實驗DHPLC和TA克隆。

 

熱啟動PCR-第一款

 

熱啟動DNA聚合酶組合套裝（貨號# 01-02-xxxxx）

 

       給你最大自由度的一款PCR組合，它的組分有：

 

       1.熱啟動DNA 聚合酶

       2.反應(yīng)buffer1---10x 反應(yīng)液B1(不含Mg2+和去污劑)

       3.反應(yīng)buffer2---10x 反應(yīng)液B2 (不含Mg2+)

       4.25 mM MgCl2

       5.10x Solution S

 

       細(xì)心的同學(xué)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，為什么一般的PCR體系只有一個buffer，而這個卻有兩個？

 

       小編為你解密啦！之所以包含兩款Buffer 是為廣大用戶考慮的，如果你的樣本不需要去污劑，或者需要自由調(diào)整Mg2+濃度，這款給你最大自由度 ，可以按照您實驗需求調(diào)整方案。而這款套裝的最大的寶藏是組分Solution S，常規(guī)PCR不需要它，但是如果你遇到擴(kuò)增困難的模板，或者高GC含量模板，10x Solution S 就要登場啦，并且你可以根據(jù)需要調(diào)整它的工作濃度，1×，2×，3×.

 

       漂亮的數(shù)據(jù)告訴你它有多好！

       

       數(shù)據(jù)顯示HoT FIREPol®熱啟動DNA酶可以很好的擴(kuò)增基因組DNA片段

 

       

       擴(kuò)增人基因組DNA的4個片段：1，2為HoT FIREPol®DNA聚合酶；3,4為競品A公司；5,6為競品B公司。

 

       如果您需要熱啟動PCR預(yù)混液，這里有多功能熱啟動PCR預(yù)混液，因為篇幅有限，這里給大家列表展示:
 

基于熱啟動酶的PCR類型	英文名稱	產(chǎn)品特色	MgCl2 濃度	*擴(kuò)增片段范圍	貨號
高GC含量PCR	HOT FIREPol® gC Master MIX	ž 尤其適合＞79%GC的DNA模板擴(kuò)增 ž MgCl2和DMSO單獨包裝 ž 更靈活設(shè)計實驗 ž 一管PCR預(yù)混液，減少操作步驟，避免加樣誤差	25 mM MgCl2	5kb	04-33-xxxxx
多重PCR	HOT FIREPol® MultiPlex Mix	ž 可以同時擴(kuò)增多個目的片段 ž 一管PCR預(yù)混液，減少操作步驟，避免加樣誤差	10 mM	5kb	04-34-xxxxx
	HOT FIREPol® MultiPlex Mix （上樣即用型）		10 mM	5kb	04-36-xxxxx
高保真PCR	HoT FIREPol® blend master mix	ž 精確度優(yōu)化的PCR，5倍保真度（與Taq酶相比），適合高需求的PCR檢測 ž 一管PCR預(yù)混液，減少操作，避免加樣誤差	• 7.5mM • 10mM • 12.5mM • 15mM	5kb	04-27-xxxxx
	HOT FIREPol® MultiPlex Mix blend master mix（上樣即用型）			5kb	04-25-xxxxx

 

      *擴(kuò)增片段范圍：可以擴(kuò)增各種類型DNA模板的片段，如cDNA, λDNA，質(zhì)粒DNA等，擴(kuò)增片段＜5kb; 以及多物種的基因組DNA （人、動物、植物等）,擴(kuò)增片段＜3kb .

 

       這些試劑盒有多好，性價比有多高呢？ 一組漂亮的數(shù)據(jù)告訴你：

 

       HOT FIREPol®高GC含量預(yù)混液在GC含量高達(dá)79％的模板上表現(xiàn)良好!

 

 

      擴(kuò)增多種高GC含量片段

 

      使用高GC含量PCR預(yù)混液從人gDNA擴(kuò)增出12種高GC的基因。 DNA模板和DMSO的終濃度分別為1 ng /μl和10％。

 

       HOT FIREPol® 多重PCR 預(yù)混液進(jìn)行4、8、14、18多重PCR檢測， 表現(xiàn)敏感而特異！

 

 

       多重PCR擴(kuò)增

 

       人類gDNA的不同基因在使用HOTFIREPol®MultiPlex Mix進(jìn)行多重反應(yīng)。擴(kuò)增了122 bp到1340 bp的DNA片段，顯示相似的高產(chǎn)量和高特異性，同時進(jìn)行了4、8、14和18多重PCR檢測。

 

       HOT FIREPol®高保真PCR可以高度特異而準(zhǔn)確的擴(kuò)增多種長度DNA片段

 

 

      當(dāng)然還有優(yōu)秀的參考文獻(xiàn)：

 

       Pellerin J.l., et al., Theriogenology (2019)

       Ogola E. O., et al. Parasites and Vectors (2019)

       Bahram, M., et al. Nature (2018).

       Otsing, E., et al. Soil Biology and Biochemistry (2018).

       Mullett, M.S., et al. Forest Pathology (2018).

       Strobel, a., et al. Environmental Toxicology and Chemistry (2018).

       lange, M.K., et al. Veterinary Parasitology (2018).

 

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