《鼠年說鼠》系列文章，每周二更新，專門解答大小鼠鏟屎官們?cè)陴B(yǎng)鼠過程中經(jīng)常遇到的繁育與鑒定類的問題，同時(shí)向大家征集問題，任何基因編輯鼠飼養(yǎng)繁殖或鑒定的困惑統(tǒng)統(tǒng)可以丟給小賽，小賽會(huì)給您回復(fù)或統(tǒng)一在后面的內(nèi)容為大家做出詳細(xì)的解答。

 

基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進(jìn)行PCR，并以凝膠電泳比對(duì)比不同基因型特異產(chǎn)物的大小，根據(jù)條帶大小來區(qū)分小鼠的不同基因型。上期我們講述了PCR反應(yīng)體系的選擇，今天我們就開始學(xué)習(xí)PCR膠濃度、電泳電壓及時(shí)間的選擇。

 

 

PCR如何選擇膠濃度？

根據(jù)PCR條帶大小來確定，一般1kb以內(nèi)用2.0~2.5%的TBE膠（0.5X TBE 緩沖液來配置）；1kb以上用1.0~1.2%的TAE膠（1X TAE 緩沖液來配置）；

 

5X TBE緩沖液母液的配制

1. 分別用電子天平稱取下列物品放入燒杯中。

2. 加800mL ddH2O使試劑溶解，倒入2L瓶中，定容至2L。

3. 使用時(shí)稀釋十倍成0.5X TBE。

 

50X TAE緩沖液母液的配制

1. 稱量Tris 484g，Na2EDTA·2H2O74.4g于2L燒杯中。

2. 向燒杯中加入ddH2O約1500mL，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/p>

3. 加入114.2mL的冰乙酸，充分?jǐn)嚢琛?/p>

4. 用ddH2O定容至2L后，室溫保存，待用。

5. 使用時(shí)稀釋50倍，即1X TAE。

 

電泳時(shí)的電壓、時(shí)間？

根據(jù)電泳槽的規(guī)格來確定， 看電泳槽多大，兩電極直接的距離，每cm 4~7V。例如一個(gè)20cm的電泳槽，電壓就應(yīng)該設(shè)為80~140V間；電泳時(shí)間是根據(jù)電壓來確定，一般是20~30min。

 

每個(gè)點(diǎn)樣孔要多少μl樣品？

一般按照?qǐng)?bào)告中的35個(gè)循環(huán)擴(kuò)出的樣品，只需要點(diǎn)5μl即可。

 

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