鈣指示劑在GPCR和鈣離子通道功能分析的應(yīng)用
將所有的鈣離子綠色熒光探針放在一起，它們的激發(fā)發(fā)射光線有多大差異？哪款產(chǎn)品的相對亮度更高？細(xì)胞內(nèi)保留時間更長？細(xì)胞加載時間更短？AAT Bioquest最亮的綠色鈣離子熒光探針的性能如何？感興趣的朋友一起來看看吧！
綠色鈣離子熒光探針的比較
| 產(chǎn)品名稱 | Ex/Em(nm) | (信號背景比)S/B | 相對亮度 | 細(xì)胞內(nèi)保留 | 加載時間 | 其他 |
| Fluo-3 | 506/526 | 2 | 50 | 相比最低 | 1 h | 在相同條件下，Calbryte探針的亮度明顯更高 |
| Fluo-4 | 494/516 | 4.5 | 100 | 低 | 1 h | |
| Fluo-8 | 490/514 | 4.5 | ~200 | 低 | 0.5-1 h | |
| Cal-520 | 492/514 | 9.0 | ~150 | 高 | 1-2 h | |
| Calbryte-520 | 490/514 | 10.0 | ~350 | 高 | 0.5-1 h |
Calbryte-520的主要功能：
1.異常明亮
2.在細(xì)胞中比Fluo-3和Fluo-4大大提高了信噪比
3.明顯增強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)保留（減少甚至消除了丙磺舒的使用）
4.更快的細(xì)胞加載
圖1.各種綠色鈣離子熒光指示劑對比圖。
Calbryte 520與市售的其他綠色鈣離子指示劑的各類數(shù)據(jù)對比
內(nèi)源性Gq的鈣含量測定---Calbryte 520 vs. Fluo-4
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圖2.用熒光顯微鏡ATP誘導(dǎo)CHO-K1細(xì)胞內(nèi)源性P2Y受體反應(yīng)。Calbryte 染料產(chǎn)生更亮的信號，更高的信噪比，并大大增強(qiáng)了細(xì)胞保留能力。
外源Gq的鈣含量測定---Calbryte 520 vs. Fluo-4
Calbryte 520無丙磺舒免洗試劑盒與FLIPR Calcium 4檢測試劑盒數(shù)據(jù)分析
圖3.CHO-K1細(xì)胞中內(nèi)源性P2Y受體對ATP的熒光信號響應(yīng)的比較。 將CHO-K1細(xì)胞以50,000個細(xì)胞/ 100 µL /孔在黑色96孔板中接種過夜。 使用Screen Quest Calbryte 520無丙磺舒和免洗的鈣測定試劑盒（紅色），F(xiàn)LIPR鈣4測定試劑盒（藍(lán)色）和Fluo-4直接鈣測定試劑盒（綠色）測量鈣通量響應(yīng)。 FlexStation 3添加了ATP（50 µL /孔）以達(dá)到最終指示的濃度。
Calbryte 520和Fluo-4在GPCR（Gi）靶向難標(biāo)記受體中的應(yīng)用數(shù)據(jù)對比
圖4.Rantes在Flexstation中刺激了趨化因子受體5（CCR5）瞬時轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞（Cat＃38105）中的鈣反應(yīng)(注：上方，深綠色線條為Calbryte 520；下方，淺綠色線條為Fluo-4)
Calbryte 520與GPCR（Gi）目標(biāo)間接cAMP檢測的應(yīng)用
圖5.嵌合G蛋白（Gqi，Gqo，Gqs，Gqz）或混雜G蛋白（Gα16）可以與Gi，Go或Gs蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合，產(chǎn)生外源性細(xì)胞內(nèi)鈣信號。 |
圖6.使用Calbryte-520 PBX NW試劑盒（#36318）在CHO-Ga16-NOP細(xì)胞（#38100）中測量了傷害感受肽刺激的鈣反應(yīng)。 |
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