《鼠年說鼠》系列文章，每周二更新，專門解答大小鼠鏟屎官們在養(yǎng)鼠過程中經常遇到的繁育與鑒定類的問題，同時向大家征集問題，任何基因編輯鼠飼養(yǎng)繁殖或鑒定的困惑統(tǒng)統(tǒng)可以丟給小賽，小賽會給您回復或統(tǒng)一在后面的內容為大家做出詳細的解答。今天我們就開始第九期的內容吧～

 

 

完全性基因敲除、基因敲入（點突變）鼠如何建系？

 

區(qū)別：

1. 轉基因

轉基因項目具有插入位點及拷貝數(shù)不確定的特點，獲得的F0代鼠可能各不相同，F(xiàn)0代不能相互交配。需要將F0與野生型多傳幾代，待基因型穩(wěn)定后通過其他實驗手段篩選出優(yōu)先傳代的品系繼續(xù)繁殖。

 

2. CRISPR/Cas9技術構建的完全性基因敲除、基因敲入（點突變）鼠

CRISPR/Cas9技術構建的F0代陽性鼠由于切割效率和非同源修復可能會出現(xiàn)不同的line，需要與野生型鼠交配獲得穩(wěn)定基因型的F1代陽性鼠。不同line的后代同樣不建議相互交配。

 

條件性敲除（敲入）鼠如何建系？

 

F0代與野生鼠互配獲得F1代雜合子，F(xiàn)1代雜合子（flox/+）互配得到F2代純合子（flox/flox），F(xiàn)2代純合子（flox/flox）與全身/組織特異性工具鼠交配獲得F3代（flox/+, Cre），F(xiàn)3代（flox/+, Cre）互配得到F4代（flox/flox, Cre），即cKO/cKI純合子。

 

條件性的項目需要與全身/組織特異性工具鼠交配達到目的，所以在繁殖過程中可根據(jù)全身/組織特異性工具鼠自身的特點安排繁殖。

 

備注：

1. 如果是通過打靶構建的全身/組織特異性工具鼠，要注意選擇與目的基因不在同一條染色體上，以免繁殖不到cKO/cKI純合子。

2. 有生殖細胞泄露風險的Cre工具鼠，繁殖時按照建議性別選擇不同基因型鼠。

3. 誘導型的Cre工具鼠，需要加藥后才能實現(xiàn)特異組織刪除。

4. F1代若有剩余的flox雜合鼠（flox/+），或想要加快獲得目標鼠，第2步可以用flox/+直接配Cre工具鼠，可縮短一代周期。

即使是組織特異性工具鼠，也可能在其他組織有泄露表達的風險。

 

往期回顧

1. 大小鼠的繁殖生理

2. 如何判斷大小鼠性別及是否懷孕？

3. 如何護理妊娠期與哺乳期的大小鼠？

4. 大小鼠的繁育應注意哪些問題以實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育？

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