胰島素受體-β抗體的主要使用方法
瀏覽次數(shù):1583 發(fā)布日期:2019-12-5
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胰島素是全身代謝的主要調(diào)節(jié)激素之一。這種激素的生物學(xué)作用包括碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)代謝的整合。胰島素增強(qiáng)葡萄糖、氨基酸和某些離子的膜轉(zhuǎn)運(yùn)。它還促進(jìn)糖原儲(chǔ)存,甘油三酯的形成和蛋白質(zhì)和核酸的合成。免疫細(xì)胞化學(xué)研究在胰島B細(xì)胞中定位胰島素。胰島素缺乏導(dǎo)致糖尿病,是一般人群發(fā)病率和死亡率的主要原因之一。胰島素也存在于B細(xì)胞來(lái)源的腫瘤中,如胰島素瘤。
功能:
胰島素降低血糖濃度。它增加了細(xì)胞對(duì)單糖、氨基酸和脂肪酸的滲透性。它加速糖酵解、戊糖磷酸循環(huán)和肝糖原合成。
胰島素受體-β抗體 主要操作步驟如下:
A.a. 在進(jìn)行標(biāo)記之前,先選用截流分子量為20000-50000的凝膠,制備ml凝膠柱,然后分別用0倍體積的%BSA/PBS/0.02%疊氮鈉和PBS洗滌柱體,封住柱下口,備用。
B. b加入0ug純化單抗至含有25ul 2.5mol/L磷酸鈉(PH7.5)的.5ml指形管內(nèi)。隨后,加入500uCi Na25I混勻。
C. c 加入25ul新配制的2mg/ml氯胺T。室溫放置60秒。再加入50ul氯胺T終止液(含2.4mg/ml偏重亞鈉,0mg/ml酪氨酸,0%甘油和0.%環(huán)乙烷酰二甲苯的PBS 胰島素受體-β抗體 標(biāo)記抗體大約在第二至第四管出現(xiàn)。無(wú)害化處理柱子和非單抗標(biāo)記部分。e. 將標(biāo)記單抗保存于4℃可使用6周時(shí)間。
D、d 生物合成法標(biāo)記將雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)在含有放射性前體的培養(yǎng)基中,隨著抗體分子的合成、組裝,同位素會(huì)標(biāo)記在抗體分子的初級(jí)氨基酸鏈上,本方法不會(huì)導(dǎo)致抗體活性的喪失。
檢測(cè)方法:熒光或著色沉淀,熒光標(biāo)記物用特殊波長(zhǎng)的光激發(fā)時(shí)發(fā)射出可見(jiàn)光。