因此,在日常實(shí)驗(yàn)中,我們應(yīng)該讀懂小鼠,站在小鼠的角度理解她,在不使她產(chǎn)生痛苦、符合生理特性、減少應(yīng)激的基礎(chǔ)上操作,就會(huì)避免很多不必要的麻煩。下面咱們就從最基礎(chǔ)也最重要的小鼠抓取與固定說(shuō)起,給大家介紹一下在小鼠實(shí)驗(yàn)中最常接觸到的幾種實(shí)用技能(小鼠的抓取與固定;給藥方式),助你以后的實(shí)驗(yàn)得心應(yīng)手起來(lái)!
一、抓取與固定
很多實(shí)驗(yàn)如小鼠給藥,采血等,均需要將小鼠固定住才可進(jìn)行操作,因此規(guī)范準(zhǔn)確地抓取動(dòng)物是實(shí)驗(yàn)的前提,既能避免動(dòng)物咬人,也更便于我們實(shí)驗(yàn)操作。對(duì)于一般簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn),雙手就是最好的固定的工具。
1. 抓取步驟
① 右手提起小鼠尾巴,將其放在鼠籠蓋或其他粗糙表面上
② 小鼠向前掙扎爬行時(shí),再用左手拇指和食指抓住鼠耳和頸部皮膚(如下圖)
③ 小鼠于左手心中后,用左手的無(wú)名指和小指夾其背部皮膚和尾部(如下圖)
應(yīng)用:一些簡(jiǎn)單的操作如小鼠灌胃、皮下注射、腹腔注射、肌內(nèi)注射、剪毛等
注意
①小鼠體型雖小但非常靈活,抓取時(shí)避免咬傷一定要又穩(wěn)又準(zhǔn)
② 抓尾巴時(shí),應(yīng)抓取小鼠尾巴的中部或根部,捏住尾端可能損傷小鼠
③ 由于小鼠一直在活動(dòng),一次沒(méi)抓好時(shí)要放開重新抓,不要急于下一步操作
2. 固定
進(jìn)行解剖、手術(shù)、心臟采血和尾靜脈注射等操作時(shí)(必要時(shí)先行麻醉),需做一定形式的固定。如尾靜脈注射或采血時(shí):如下圖為小鼠固定器和尾靜脈注射。
第一步:打開尾蓋,手提起小鼠尾巴,讓動(dòng)物頭對(duì)準(zhǔn)鼠筒口并使其本能的爬入固定器內(nèi);
第二步:調(diào)節(jié)小鼠固定器的長(zhǎng)短,留出尾巴即可進(jìn)行操作。
小鼠固定器
尾靜脈注射的小鼠固定
如果需要解剖或者心臟注射時(shí):
① 麻醉小鼠
② 處于背臥式后再用大頭針(或者固定膠布)將鼠前后肢依次固定在蠟板上再進(jìn)行操作。
應(yīng)用: 對(duì)小鼠的解剖、手術(shù)和心臟采血等操作
二、小鼠常用給藥方法
進(jìn)行藥物治療時(shí),為了達(dá)到安全合理用藥,必須根據(jù)治療目的選擇適當(dāng)?shù)慕o藥途徑。接下來(lái)介紹一下常用到的小鼠給藥途徑的操作方式及各自特點(diǎn)。
因藥物性質(zhì)和給藥目的不同,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中大概分為以下三種給藥方式:
1. 小鼠自動(dòng)攝入
2. 灌胃
3. 注射給藥(皮內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、靜脈注射、腦內(nèi)注射等)
1. 小鼠自動(dòng)攝入
一般是將藥物摻入飼料或者飲水中,使動(dòng)物自動(dòng)攝入
優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單方便
缺點(diǎn):劑量不能準(zhǔn)確掌握,且動(dòng)物個(gè)體間服藥量差異較大
2. 灌胃
藥物經(jīng)口腔、食管直接送入胃中,要經(jīng)過(guò)消化過(guò)程才能進(jìn)入體循環(huán),再到血液發(fā)揮作用。多用于急性試驗(yàn)中的經(jīng)口給藥法
操作方法
①抓取小鼠,頭部向上,頭向后仰使口腔和食管呈直線
②右手持注射器(一般用1ml的注射器配灌胃針頭),從一側(cè)口角進(jìn)針,沿著上顎推至后頭,以針頭輕壓舌根
③灌胃針前端順利進(jìn)入食管后,緩慢推進(jìn),插入針時(shí)應(yīng)無(wú)阻力;
若感到阻力或動(dòng)物掙扎時(shí),應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?/p>
參考給藥量:小鼠0.1ml/10g體重,最大不超過(guò)0.5ml/10g體重
優(yōu)點(diǎn):劑量準(zhǔn)確,是常用,比較安全、方便經(jīng)濟(jì)的給藥方法,
缺點(diǎn):吸收不恒定,誤差較大。如某些藥物因本身的被物理性質(zhì)而不能吸收;
有些藥物對(duì)胃粘膜有刺激作用可引起嘔吐;藥物與食物同時(shí)存在時(shí),吸收會(huì)有影響
3. 注射給藥(通過(guò)注射的方式,使藥物吸收)
優(yōu)點(diǎn):劑量準(zhǔn)確,作用快,是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的給藥方法
缺點(diǎn):操作比較復(fù)雜,安全性較低、風(fēng)險(xiǎn)較大
根據(jù)注射位置分為多種注射方式。為了便于理解,首先了解一下皮膚構(gòu)造,
如下圖:依次是表皮、真皮、皮下組織和肌肉層。
注射給藥中,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康,主要分為以下幾種:
1. 皮內(nèi)注射
將藥物注射于表皮與真皮之間(結(jié)合上圖),緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi),針頭與皮膚呈10-15°角先刺入皮下,針頭向上挑起進(jìn)入皮內(nèi)再稍刺入,推出藥夜,見皮膚表面鼓起小皮丘,若皮丘不很快消失,證明藥液在皮內(nèi)。一般選擇小鼠背部脊柱兩側(cè)皮膚進(jìn)行注射
特點(diǎn):適用于皮膚過(guò)敏試驗(yàn),觀察皮膚反應(yīng)
參考給藥量:小鼠每次每點(diǎn)不超過(guò)0.05ml,兩點(diǎn)間隔1cm以上
2. 皮下注射
將藥物注射于皮下,提起注射部位皮膚使皮下形成空隙,將注射針沿皮膚推進(jìn)5-10mm,若針頭可輕松左右擺動(dòng),表明針頭在皮下,輕輕抽吸無(wú)回流物,則可注入藥物,拔出針后應(yīng)按壓針刺部位,防止藥液外漏和促進(jìn)藥物吸收,一般選擇小鼠的背部
特點(diǎn):皮下注射的吸收速率通常均勻而緩慢,因而作用持久;僅適用于對(duì)組織無(wú)刺激性的藥物,否則可引起劇烈疼痛和組織壞死
參考給藥量:小鼠0.1~0.3ml/10g體重
3. 肌肉注射
將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉,注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉,回抽針?biāo)ㄈ鐭o(wú)回血,將藥物注入。一般選肌肉發(fā)達(dá),無(wú)大血管通過(guò)的部位,多選臀部
特點(diǎn):藥物水溶液肌肉注射時(shí)吸收十分迅速,適用于油溶液和某些刺激性物質(zhì)
參考給藥量:小鼠給藥量每次小于0.05-0.1ml
4. 腹腔注射
抓取小鼠,使其腹部朝上頭部略向下垂,抓緊背部皮膚使使腹部皮膚緊繃,于腹中線一側(cè)刺入皮下,在皮下平行腹中線推進(jìn)針頭3-5mm,再以45°角向腹腔內(nèi)刺入,當(dāng)針尖通過(guò)腹肌后,抵抗力消失,回抽無(wú)回流物,緩慢推入藥物。
特點(diǎn):是很常見的給藥方式,注射劑量大,注射后腹膜能力吸收強(qiáng);尤其是在麻醉時(shí),最常見的麻醉方法就是麻醉藥物腹腔注射
參考給藥量:每次給藥量小鼠0.2-0.8ml
5. 靜脈注射
小鼠一般采取尾靜脈注射方式,鼠尾靜脈有三根,左右兩側(cè)及背側(cè)各一根,一般選擇左右兩側(cè)尾靜脈,先距尾尖1/3處先緩注少量藥液,如無(wú)阻力,表示針頭已進(jìn)入靜脈,可繼續(xù)注入。
特點(diǎn):將藥物直接輸入血液,沒(méi)有消化過(guò)程,藥物直接到達(dá)循環(huán)系統(tǒng),藥效迅速可靠。但由于高濃度的藥物迅速到達(dá)血漿和組織,增加了發(fā)生不良反應(yīng)的危險(xiǎn)性。反復(fù)注射還有賴于持續(xù)保持靜脈通暢。不適用于油溶液或不溶性物質(zhì)。
參考給藥量:0.05ml - 0.1ml/10g
6. 腦內(nèi)注射
一手拇指和食指抓住動(dòng)物兩耳后的頭皮固定頭部,使注射針頭和額頂顱骨呈45°角,在中線外側(cè)2mm處刺入,注射速度一定要慢,避免引起顱內(nèi)壓急遽升高
特點(diǎn):多在微生物學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
參考給藥量:每次低于0.03ml
7. 其他注射
除了上述常見的幾種注射給藥方式外,根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模有其他注射方式,如心室注射等,這里就不在贅述了。
小鼠的固定不僅僅是為了避免我們被咬傷,更是很多實(shí)驗(yàn)操作成功的前提,所以我們一定要熟練掌握。另外,在小鼠的各種給藥方式中尾靜脈注射難度是最大的,相信困擾了很多人,下一期我們將為大家詳細(xì)介紹尾靜脈注射秘訣,并附上最全面最專業(yè)的視頻教材,一定不要錯(cuò)過(guò)哦!