脂肪及結(jié)締組織的染色方法

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 脂肪的蘇丹Ⅲ(Ⅳ)染色方法：
   1) 冰凍切片用70％乙醇漂洗，不超過30s。
   2) 切片入蘇丹Ⅲ(Ⅳ)染液中3~15min或延長(zhǎng)至1h。
   3) 新50％~70％乙醇分化，直至洗去切片上的浮色為止，蒸餾水洗。
   4) 用稀釋1倍的明礬蘇木精淺染核1min或稍長(zhǎng)。
   5) 用濾紙將切片及周圍的水分吸干。
   6) 用甘油或甘油明膠封固。
結(jié)果判定：脂肪呈桔黃色或桔紅色，細(xì)胞核淺藍(lán)色。

2. 結(jié)締組織的常見染色方法

   1) Mallory三色染色法：常用于判定多種組織、器官的病變程度及修復(fù)情況，區(qū)分腫瘤組織中的纖維成分與平滑肌。
染色步驟：
      A. 中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
      B. 重鉻酸鉀液10min。
      C. 蒸餾水沖洗2min，蒸餾水2次。
      D. 酸性復(fù)紅液2min，蒸餾水稍洗。
      E. 苯胺藍(lán)液20min，95%乙醇快速分化。
      F. 直接用無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
結(jié)果判定：膠原和網(wǎng)狀纖維呈藍(lán)色。
   2) Van Gieson苦味酸酸性復(fù)紅法：可以顯示組織、器官的損傷、修復(fù)及硬化情況，特別是用于鑒別腫瘤組織中的膠原纖維與平滑肌纖維，可為診斷提供重要依據(jù)。
染色步驟：
      A. 組織切片按常規(guī)脫蠟水洗。
      B. 用Weigert蘇木素液染細(xì)胞核5~l0 min。
      C. 自來水充分洗滌數(shù)分鐘。
      D. 用顯微鏡檢查細(xì)胞核的著色程度，過深可用0.5%鹽酸乙醇分化。
      E. 自來水洗至變藍(lán)；用蒸餾水洗。
      F. 用Van Gieson液染1~5 min。
      G. 傾去染液，直接用95%乙醇分化和脫水。
      H. 無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
結(jié)果判定：膠原纖維呈深粉紅色，肌纖維、胞漿及紅細(xì)胞黃色，細(xì)胞核呈棕黑色或蘭黑色。
   3) 網(wǎng)狀纖維染色－Wider染色法：可以用來顯示病變組織網(wǎng)狀支架的破壞情況。特別是在腫瘤病理診斷中，網(wǎng)狀纖維染色對(duì)于鑒別來源于上皮組織和間葉組織的惡性腫瘤具有重要價(jià)值。
染色步驟：
      A. 組織切片脫蠟至水。
      B. 10%磷鉬酸，2~5min。蒸餾水沖洗，5min。
      C. 1%硝酸鈾，5s。蒸餾水沖洗，10s。
      D. 氧化銀溶液，5~10min。
      E. 95%乙醇速洗，1~2s。
      F. 還原液還原，1~2s。蒸餾水沖洗，2min。
      G. 0.2%氯化金調(diào)色，2~20s。蒸餾水沖洗，5min。
      H. 5%次亞硫酸鈉，2min。蒸餾水沖洗，2min。
      I. 核固紅染細(xì)胞核，5~10min。水稍洗。
      J. 常規(guī)無(wú)水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。
結(jié)果判定：網(wǎng)狀纖維呈黑色、細(xì)胞核呈紅色。