背景：缺血性腦血管病嚴(yán)重危害人類的健康，建立一種與人腦梗塞類似的動(dòng)物模型使之適合溶栓治療研究具有重要的研究意義和實(shí)用價(jià)值。目前被廣泛應(yīng)用的「阻斷大腦中動(dòng)脈制備局部腦梗塞動(dòng)物模型」方法，由于其存在側(cè)支循環(huán)，受累的腦組織缺血程度常不一致，梗塞灶的大小和位置也有差異，加之大腦中動(dòng)脈阻斷需要一定的手術(shù)技巧，故其應(yīng)用受到定的限制。加之大腦中動(dòng)脈阻斷需要一定的手術(shù)技巧，故其應(yīng)用受到一定的限制。靜脈注射微血栓栓塞腦內(nèi)小動(dòng)脈造成的腦梗塞，受血栓大小的影響，而且栓塞部位不易控制，也有其應(yīng)用局限性。

自 1984 年 Dietrich 和 Watson 等首先報(bào)道，采用光化學(xué)法誘導(dǎo)腦梗死動(dòng)物模型以來(lái)，建立該模型的方法逐漸得到發(fā)展、完善和成熟，現(xiàn)已成為一種重要的腦梗死動(dòng)物型，并廣泛用于腦梗死的神經(jīng)生化、生理、病理，以及防治等方面的研究。這里我描述一種實(shí)驗(yàn)報(bào)告采用光化學(xué)法誘導(dǎo)腦梗塞模型的建立。

1.材料準(zhǔn)備

1.1 動(dòng)物：成年大鼠，250 g

1.2 試劑：

玫瑰紅 （Sigma Aldrich, Steinheim, D）

4% 多聚甲醛 （Merck KGaA, Darmstadt, D）

1.3 設(shè)備和耗材：

1.3.1小動(dòng)物麻醉、腦立體定位（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）



1.3.2顯微外科手術(shù)器械包（型號(hào)：SP0003-R,生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）



1.3.3 561 mm 黃綠光激光器（型號(hào)：R-LG561-100-A5,生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）：用于對(duì)動(dòng)物頭部進(jìn)行光刺激造模。



1.3.4 小動(dòng)物保溫箱（型號(hào)：912-001,生產(chǎn)廠家：LYON/USA），供動(dòng)物手術(shù)后護(hù)理。



1.3.5 SMART3.0 小動(dòng)物行為視頻追蹤系統(tǒng)（生產(chǎn)廠家：Panlab/Spanish），供造模后通過(guò)動(dòng)物行為評(píng)判神經(jīng)功能。

1.3.6腦模具（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司），供腦切片染色。


1.3.7其他輔助設(shè)備和耗材（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）



2.實(shí)驗(yàn)方法

STEP1:

動(dòng)物麻醉和頭部固定：動(dòng)物經(jīng)麻醉機(jī)誘導(dǎo)進(jìn)入麻醉，移到定位儀裝置進(jìn)行頭部固定和麻醉維持，穩(wěn)定一會(huì)后，使用鑷子夾足，測(cè)試麻醉的深度，當(dāng)呼吸平緩，無(wú)壓足縮回反應(yīng)時(shí)，說(shuō)明進(jìn)入實(shí)驗(yàn)麻醉中期。另外開啟體溫維持儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)期動(dòng)物體溫的維持（如圖 1）。



STEP2:

左股靜脈暴露和空心與孟加拉玫瑰聚乙烯導(dǎo)管輸液，導(dǎo)管用線進(jìn)行固定（如圖 2）。



STEP3:

縱向切開頭皮（2.0-2.5 厘米）以暴露頭骨。為了避免傷口并發(fā)癥，頭骨暴露應(yīng)進(jìn)行單一的切割。輕輕刮開顱骨表面的一層膜，使冠狀面和矢量中線、前囟點(diǎn)清晰可見(jiàn)，暴露顱骨表面（如圖 3）。

STEP4:

波長(zhǎng)為 561nm 直徑為 8 mm 的激光束立體定向定位在顱骨 AP:0.5 mm、ML:3.5 mm 表面。顱骨被照射 20 分鐘。在照射前 2 分鐘，經(jīng)預(yù)留導(dǎo)管緩慢注入玫瑰紅（0.133?毫升/千克體重，10?毫克/毫升生理鹽水）到靜脈。注射完后，拔出導(dǎo)管，進(jìn)行進(jìn)行皮膚的縫合（如圖 4）。



STEP5:

術(shù)后，把大鼠放回到籠子，在保溫箱中 12 h 光明和黑暗周期和食物和水自由采食的護(hù)理。

STEP6:

對(duì)照組動(dòng)物接受相同的實(shí)驗(yàn)操作，包括玫瑰靜脈注射，但沒(méi)有激光對(duì)顱骨表面進(jìn)行照明。

3.效果評(píng)定

3.1神經(jīng)功能評(píng)分系統(tǒng)測(cè)試





3.2生理組織觀察