最近,科學(xué)家在JBC(Journal of Biological Chemistry 291, 5270-5277) 發(fā)表了一篇很有價(jià)值的文獻(xiàn), 發(fā)現(xiàn)Naa10這個(gè)蛋白并不具備蛋白質(zhì)賴氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶的性質(zhì)。 文獻(xiàn)采用了2家不同抗體公司的抗乙酰賴氨酸抗體, 一家來(lái)自CST (圖 A,Cell Signaling Technology的抗體,catalog no.9681);另一家來(lái)自藍(lán)光生物的母公司ImmuneChem(圖B, ImmuneChem的抗體, catalog no. ICP0380)。不同的抗體來(lái)源結(jié)果各異, 究竟哪一家的更好? 先來(lái)了解和比較一下文獻(xiàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
兩家來(lái)源的抗體各顯示了各異的結(jié)果.
1)從圖B (抗體來(lái)源ImmuneChem, ICP0380)的結(jié)果看可以做這樣的結(jié)論:Naa10 不能乙;Runx2和MSRA; Runx2及MSRA可以被Acetyl-CoA非酶促反應(yīng)乙;。 這和文章的結(jié)論一致。
2)若從圖A (抗體來(lái)源Cell Signalling)的結(jié)果(圖紅圈)來(lái)看,只能說(shuō)H3, Runx和MSRA三個(gè)底物都不適合做本次實(shí)驗(yàn)。 因?yàn)榭贵w對(duì)空白組實(shí)驗(yàn)(底物沒(méi)有酶和Acety-CoA)都能識(shí)別, 從特別從H3乙;慕Y(jié)果看,很難體現(xiàn)是否有酶促乙;磻(yīng)。
3)但從圖B (抗體來(lái)源ImmuneChem, ICP0380)的結(jié)果(藍(lán)方框)看,該抗體能特異性的識(shí)別了乙;H3, 可以得出結(jié)論只有hMOF酶和Acety-CoA同時(shí)存在催化下, H3發(fā)生了乙;。
可以說(shuō)一個(gè)抗體的特異性決定其檢測(cè)結(jié)果的可靠性。 若一個(gè)抗體不特異,不能分辨蛋白質(zhì)是否被乙酰化,結(jié)果則不可靠, 結(jié)論就不正確,誤導(dǎo)了科學(xué)結(jié)論,在刊登科技文獻(xiàn)時(shí)就會(huì)被評(píng)審質(zhì)疑,浪費(fèi)人力財(cái)力資源。 這是很悲催的事情!
選擇一個(gè)正確的抗體做你的研究,事關(guān)重要,非同小可!!!
如何評(píng)價(jià)一個(gè)抗體是否泛乙;贵w? 提供以下倆點(diǎn)參考:
1)在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上要發(fā)現(xiàn)這個(gè)抗體是用乙酰賴氨酸特異的免疫親和層析分離純化得到的, 是特異性抗體的可能性大。
2)在產(chǎn)品介紹或科學(xué)文獻(xiàn)證明:這個(gè)抗體的抗乙酰化蛋白/多肽免疫信號(hào)(WB或ELISA)可以被已知乙;鞍兹缫阴;疊SA(acetylated BSA ,ICP6090)所抑制。
3)同時(shí)具備以上2點(diǎn)特性的抗乙;嚢彼峥贵w,幾乎可以肯定是乙;嚢彼崽禺愋钥贵w。
ImmuneChem的乙酰化抗體, 產(chǎn)品資料是這樣的:
1) 該抗乙;嚢彼峥贵w(ICP0380) 是采用乙酰賴氨酸填料進(jìn)行免疫親和層析分離純化得到的高純度抗體!
2)該抗體所制備的抗體填料(ICP0388)已經(jīng)成為國(guó)際上乙;鞍踪|(zhì)組學(xué)研究廣泛應(yīng)用的乙酰化蛋白/多肽的免疫親和純化富集材料。
3)科學(xué)證明我們抗體的乙酰化蛋白結(jié)合信號(hào)可以被乙;BSA競(jìng)爭(zhēng)性抑制, 文獻(xiàn)發(fā)表于 Molecular Cell Vol 23, Issue 4, p607–618 :
圖:用IMMUNECHEM的抗體檢測(cè)細(xì)胞飼-餓(左2道)處理的乙酰化蛋白信號(hào)可以被乙;疊SA抑制(右2道).