皮膚粘膜淋巴結(jié)綜合癥（muco-cuta-meous lymph node syndrome，MCLS）又稱川崎�。↘awasaki disease），是一種以全身血管炎變?yōu)橹饕�病理的急性發(fā)熱性出疹性小兒疾病。雖然已有的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些血來源的蛋白分子或者miRNA有潛在的診斷能力，但是，其有效性還有待提高。外泌體，一種包含了細(xì)胞特異性信息的囊泡結(jié)構(gòu)，保護(hù)了內(nèi)部的分子免受胞外酶類的降解。因此，通過檢測(cè)的外泌體中的遺傳物質(zhì)，是尋找可靠診斷biomarker的理想方式。本研究從檢測(cè)血清外泌體中的miRNA入手，篩選了可用于KD特異性診斷biomarker的潛在分子。

研究思路

研究結(jié)果

1. 外泌體分離與確認(rèn)

通過SBI的ExoQuick試劑盒分離，研究人員得到了KD病人，正常人，和IVIG治療后病人的血清外泌體。電鏡觀察與CD9, CD81 和TSG101三個(gè)marker蛋白鑒定，研究人員確認(rèn)了從血清中分離出來了的外泌體分子。

2. 外泌體中KD特異性miRNA篩選

為尋找到能特異性反映KD特征的biomarker，研究人員運(yùn)用miRNA表達(dá)譜芯片（伯豪生物提供），比較了外泌體中的miRNA表達(dá)差異。分析顯示，miR-1260a,miR-4701-5p, miR-885-5p, miR-328 和miR-197-3p，在KD組中上調(diào)，而在IVIG治療后又下調(diào)。

3. 外泌體中miRNA表達(dá)驗(yàn)證

為驗(yàn)證芯片結(jié)果的可靠性，研究人員對(duì)11個(gè)候選的miRNA，在其他獨(dú)立的60個(gè)樣本（20個(gè)健康人，20個(gè)KD病人，20個(gè)IVIG治療病人）和5個(gè)腺病毒感染病人（ADV）進(jìn)行了驗(yàn)證。由于目前沒有外泌體中的miRNA內(nèi)參基因，研究人員把每一個(gè)的表達(dá)情況與所有11個(gè)比較作為參考。結(jié)果顯示，miR-1246/miR-4436b-5p在KD和正常人，IVIG治療與KD中差異顯著，在正常人和IVIG治療中不顯著；miR-197-3p/miR-671-5p則只在ADV和KD中差異顯著。

4. KD診斷biomarker模型驗(yàn)證

為驗(yàn)證上述篩選到的biomarker的有效性，研究人員用另外兩個(gè)醫(yī)院的樣本進(jìn)行了驗(yàn)證。這些病人包括54個(gè)健康個(gè)體，54個(gè)KD病人，10個(gè)ADV病人，13個(gè)EBV病人，12個(gè)JIA病人和1個(gè)SF病人。兩個(gè)醫(yī)院的病人（Centre 1和 Centre 2）的盲測(cè)結(jié)果顯示，KD病人基本能和非KD病人區(qū)分開來。因此，通過檢測(cè)外泌體中的上述4個(gè)miRNA的表達(dá)， 可以作為潛在的KD診斷biomarker。

研究結(jié)果

本研究通過篩選血清外泌體中的miRNA，運(yùn)用表達(dá)譜芯片找到了KD病人特異性表達(dá)的miRNA。后期通過大量的病人樣本，健康樣本和其他類似疾病樣本驗(yàn)證，表明其找到的miRNAs可以作為KD特異性的診斷指標(biāo)。該研究從外泌體的角度為KD診斷提供了新的思路，作為其他疾病研究的小伙伴們，該研究還是可以參考的。

原文出處：
Jia HL, Liu CW, Zhang L, et al.Sets of serum exosomal microRNAs as candidate diagnostic biomarkers for Kawasaki disease. Sci Rep. 2017 Mar 20;7:44706.