光化學(xué)法誘導(dǎo)腦缺血（MCAO）模型的建立

瀏覽次數(shù)：3740　發(fā)布日期：2016-11-1　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

背景：缺血性腦血管病嚴(yán)重危害人類的健康，建立一種與人腦梗塞類似的動(dòng)物模型使之適合溶栓治療研究具有重要的研究意義和實(shí)用價(jià)值。目前被廣泛應(yīng)用的“阻斷大腦中動(dòng)脈制備局部腦梗塞動(dòng)物模型”方法，由于其存在側(cè)支循環(huán)，受累的腦組織缺血程度常不一致，梗塞灶的大小和位置也有差異，加之大腦中動(dòng)脈阻斷需要一定的手術(shù)技巧，故其應(yīng)用受到定的限制。加之大腦中動(dòng)脈阻斷需要一定的手術(shù)技巧，故其應(yīng)用受到一定的限制。靜脈注射微血栓栓塞腦內(nèi)小動(dòng)脈造成的腦梗塞，受血栓大小的影響，而且栓塞部位不易控制，也有其應(yīng)用局限性。

自1984年Dietrich和Watson等首先報(bào)道，采用光化學(xué)法誘導(dǎo)腦梗死動(dòng)物模型以來，建立該模型的方法逐漸得到發(fā)展、完善和成熟，現(xiàn)已成為一種重要的腦梗死動(dòng)物型，并廣泛用于腦梗死的神經(jīng)生化、生理、病理，以及防治等方面的研究。這里我描述一種實(shí)驗(yàn)報(bào)告采用光化學(xué)法誘導(dǎo)腦梗塞模型的建立。

1. 材料準(zhǔn)備

1.1 動(dòng)物：成年大鼠，250g

1.2 試劑：

玫瑰紅(Sigma Aldrich, Steinheim, D)

4%多聚甲醛(Merck KGaA, Darmstadt, D)

1.3 設(shè)備和耗材：

1.3.1 小動(dòng)物麻醉、腦立體定位（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）

1.3.2 顯微外科手術(shù)器械包（型號(hào)：SP0003-R，生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）

1.3.3 561mm黃綠光激光器（型號(hào)：R-LG561-100-A5，生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）：用于對(duì)動(dòng)物頭部進(jìn)行光刺激造模。

1.3.4 小動(dòng)物保溫箱（型號(hào)：912-001，生產(chǎn)廠家：LYON/USA），供動(dòng)物手術(shù)后護(hù)理。

1.3.5 SMART3.0小動(dòng)物行為視頻追蹤系統(tǒng)（生產(chǎn)廠家：Panlab/Spanish），供造模后通過動(dòng)物行為評(píng)判神經(jīng)功能。

1.3.6 腦模具（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司），供腦切片染色。

1.3.7 其他輔助設(shè)備和耗材（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）

2.實(shí)驗(yàn)方法

STEP1：

動(dòng)物麻醉和頭部固定：動(dòng)物經(jīng)麻醉機(jī)誘導(dǎo)進(jìn)入麻醉，移到定位儀裝置進(jìn)行頭部固定和麻醉維持，穩(wěn)定一會(huì)后，使用鑷子夾足，測(cè)試麻醉的深度，當(dāng)呼吸平緩，無壓足縮回反應(yīng)時(shí)，說明進(jìn)入實(shí)驗(yàn)麻醉中期。另外開啟體溫維持儀進(jìn)行實(shí)驗(yàn)期動(dòng)物體溫的維持（如圖1）。

圖1

STEP2：

左股靜脈暴露和空心與孟加拉玫瑰聚乙烯導(dǎo)管輸液，導(dǎo)管用線進(jìn)行固定（如圖2）。

圖2

STEP3：

縱向切開頭皮（2.0-2.5 厘米）以暴露頭骨。為了避免傷口并發(fā)癥，頭骨暴露應(yīng)進(jìn)行單一的切割。輕輕刮開顱骨表面的一層膜，使冠狀面和矢量中線、前囟點(diǎn)清晰可見，暴露顱骨表面（如圖3）。

STEP4：

波長(zhǎng)為561nm直徑為8mm的激光束立體定向定位在顱骨AP:0.5mm、ML:3.5mm表面。顱骨被照射20分鐘。在照射前2分鐘，經(jīng)預(yù)留導(dǎo)管緩慢注入玫瑰紅（0.133 毫升/千克體重，10 毫克/毫升生理鹽水）到靜脈。注射完后，拔出導(dǎo)管，進(jìn)行進(jìn)行皮膚的縫合（如圖4）。