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如何使用Molecular Devices SpectraMax Paradigm多功能讀扳機(jī)進(jìn)行HTRF人腫瘤壞死因子實(shí)驗(yàn)?

瀏覽次數(shù):3903 發(fā)布日期:2016-8-23  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

本應(yīng)用記錄了我們?nèi)绾问褂肧pectramax Paradigm 多功能讀扳機(jī)執(zhí)行穩(wěn)定,免洗細(xì)胞因子實(shí)驗(yàn),并具有良好的Z因子。

HTRF是由Cisbio試劑公司研發(fā)的多功能技術(shù),用于檢測(cè)生物分子間相互作用。它結(jié)合了熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)技術(shù)和時(shí)間分辨熒光(TRF)技術(shù),實(shí)現(xiàn)消除半衰期短的背景熒光。這個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用供體和受體熒光染料。當(dāng)供體和受體之間足夠近的情況下,由光源(如,高能閃爍氙燈)照射產(chǎn)生的供體激發(fā)光就會(huì)通過能量轉(zhuǎn)移機(jī)制到受體,反過來(lái)作為受體的特定激發(fā)波長(zhǎng)。HTRF采用四個(gè)特定的熒光染料,可以組合成兼容的供體-受體TR-FRET對(duì)。供體為銪元素(Eu3+)和鋱?jiān)兀╨umi4™- Tb),其長(zhǎng)壽命熒光使它們可以應(yīng)用在時(shí)間分辨熒光實(shí)驗(yàn)中。兩種受體已經(jīng)被研發(fā)用于HTRF實(shí)驗(yàn),分別是, XL665 and d2。都具有激發(fā)光譜重疊的HTRF供體的發(fā)射光譜。每個(gè)都在665nm有一個(gè)發(fā)射峰,但這個(gè)區(qū)域的波長(zhǎng)并不能激發(fā)供體,或者激發(fā)非常弱。最早期的的HTRF受體,XL665,來(lái)源于紅藻的藻膽蛋白色素的純化。第二代受體,d2,是一種改進(jìn)的別藻藍(lán)蛋白,比XL665小100倍,用來(lái)緩解可能發(fā)生在XL665檢測(cè)時(shí)的空間位阻問題。

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