催產(chǎn)素對(duì)大鼠應(yīng)激模型母性攻擊行為的影響

【摘要】 目的探究不同劑量的催產(chǎn)素對(duì)于Wistar孕鼠應(yīng)激模型攻擊行為的影響。方法將40只孕鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為實(shí)驗(yàn)組(A、B、C)與對(duì)照組(D)，每組10只；其中，A、B、C三組每次強(qiáng)迫游泳應(yīng)激前分別經(jīng)腹腔給予o．3 mg／kg、1．0 rag／kg、2．0 mg／kg的催產(chǎn)素，D組給予等體積生理鹽水。各組待分娩第3天均進(jìn)行母性攻擊行為測(cè)試，主要觀察母鼠的攻擊總數(shù)、撕咬次數(shù)、攀壓次數(shù)、攻擊潛伏期、攻擊持續(xù)時(shí)間等項(xiàng)目，比較各組攻擊行為的差異，并用高架十字迷宮對(duì)各組大鼠在開臂、閉臂的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較。結(jié)果A組與D組在攻擊持續(xù)時(shí)間和潛伏期方面有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(147．60+23．92)s、(79．70_+9．88)s，P<0．05]，其他項(xiàng)目無(wú)差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)；B組與D組除攻擊總數(shù)(P>0．05)外其他均有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義『(3．10_+0，87)次、(13．60_+5．14)次、(91．30+9．74)s、(167．20_+30．02)s，P<O．01]；C組與D組各指標(biāo)均有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(6．40±1．34)次、(15．10+4．35)次、(23．70_+3．46)次、(49．80±5．53)s、(215．60+39．55)s，尸<0．叭]；A組與B組各指標(biāo)有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；B組與C組除攀壓次數(shù)(P>0．05)，其他均有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<O．01)。在高架十字迷宮中，A組進(jìn)入開臂次數(shù)百分率和進(jìn)入開臂時(shí)間百分率較D組均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(百分率數(shù)值分別為o．47±0．13、0．13±0．05，P<0．01)，B組與D組差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)，A組與B組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，B組與C組在進(jìn)入開臂時(shí)間百分率中無(wú)差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。結(jié)論 催產(chǎn)素可正性調(diào)節(jié)應(yīng)激對(duì)母性攻擊行為的影響，改善母仔親密性，且催產(chǎn)素在此過(guò)程中具有劑量依從性。

【關(guān)鍵詞】應(yīng)激模型；焦慮；催產(chǎn)素；母性攻擊行為；高架十字迷宮

應(yīng)激(Stress)，又稱應(yīng)激反應(yīng)，廣泛存在于一切生物體中。實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，應(yīng)激可以誘發(fā)多種行為的改變，如焦慮、抑郁、逃避／攻擊行為異常等；另外，應(yīng)激還可激活神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，繼而引起糖皮質(zhì)激素和兒茶酚胺水平顯著增高以及催產(chǎn)素少量的增加。催產(chǎn)素(Oxytocin，OXT)，又叫縮宮素，主要是由視上核和室旁核大細(xì)胞神經(jīng)元合成的一種九肽神經(jīng)內(nèi)分泌激素，并通過(guò)下丘腦．垂體．性腺軸作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)，除了最為常見的促進(jìn)子宮收縮和泌乳作用之外，最新國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，還具有凋節(jié)社交、母性行為、抗應(yīng)激的作用，而且孕婦體內(nèi)催產(chǎn)素的含量與子女的親密度有很大的關(guān)聯(lián)性，因此，國(guó)外學(xué)者又稱其為“親密激素”。而母性攻擊行為(maternal ag—gression，MA)是近些年來(lái)國(guó)內(nèi)外繼母愛行為研究之后又一復(fù)雜的行為學(xué)名詞，是指嚙齒類動(dòng)物為了防御潛在的入侵者對(duì)幼崽構(gòu)成的威脅而發(fā)揮的一種保護(hù)性行為反應(yīng)，與母性行為密切相關(guān)引。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，MA與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，并主要由體內(nèi)的催產(chǎn)素進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而維持著種群的穩(wěn)定和健康發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)強(qiáng)迫游泳建立孕鼠應(yīng)激模型，進(jìn)而研究MA的改變，并通過(guò)注射不同劑量的催產(chǎn)素來(lái)探討其是否可以通過(guò)抗應(yīng)激來(lái)起到保護(hù)MA的作用。

材料與方法

一、材料

1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與藥品：健康清潔級(jí)Wistar孕大鼠40只，體質(zhì)量(260+30)g，大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào)：SCXK(遼)2008—0002，標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境飼養(yǎng)。按照隨機(jī)數(shù)字表將40只孕鼠隨機(jī)分為A、B、C、D四組，每組10只。性成熟雄鼠20只，體質(zhì)量(250+_25)g，作為人侵鼠。專用Wistar大鼠催產(chǎn)素注射液、o．9％生理鹽水由佳木斯大學(xué)生命科學(xué)中心行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

2．實(shí)驗(yàn)儀器（由上海欣軟信息科技有限公司提供）：(1)強(qiáng)迫游泳筒：圓柱狀簡(jiǎn)規(guī)格30 cmx50 cm(直徑×高)，水深40cm。(2)攻擊行為實(shí)驗(yàn)箱：規(guī)格61 cmx 4lcmX51 cm，上方覆蓋兩塊透明玻璃板，里面均勻鋪上一層約l ctn厚的干燥木屑。(3)高架f字迷宮：由--x寸開臂(50 cmX10 cm)、一對(duì)閉臂(50 cm×10cmX40cm)和一個(gè)中央?yún)^(qū)(10cmxl0cm)組成。迷宮距地面50 cm。迷宮的底面和閉臂的墻面是由黑色的塑膠板構(gòu)成的。

二、方法

1．造模：參照經(jīng)典強(qiáng)迫游泳造模方法進(jìn)行一。于孕期第14日至分娩當(dāng)日期間，在造模前分別給予A、B、C三組孕鼠腹腔注射0．3 rag／kg、1．0 111靜7kg、2．0 mg／kg催產(chǎn)素，D組給予等體積的生理鹽水。注射10 min后，將大鼠放人設(shè)定溫度(19～21℃)的強(qiáng)迫游泳筒內(nèi)游泳10 min，每次游泳完畢后擦干，直接放回干燥的窩籠中。

2．行為學(xué)檢測(cè)(1)母性攻擊行為實(shí)驗(yàn)：在安靜自然光線下進(jìn)行，每次實(shí)驗(yàn)前把母鼠和幼崽放入攻擊行為實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)適應(yīng)2 nlin，之后將入侵鼠放入箱內(nèi)，開始視頻拍攝10 rain。觀察指標(biāo)如下：攻擊總次數(shù)、攻擊潛伏期、攻擊持續(xù)時(shí)間、撕咬次數(shù)、攀壓次數(shù)。(2)高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)：在安靜黑暗的房間進(jìn)行，先打開迷宮l：方100 cm處的的白熾燈；將母鼠放入實(shí)驗(yàn)箱適應(yīng)5 min后，放入迷宮指定位置檢測(cè)5 nlin(待放鼠于迷宮前10 s打開拍攝系統(tǒng)正式開始檢測(cè))。觀察指標(biāo)有常規(guī)指標(biāo)和相關(guān)探究．危險(xiǎn)評(píng)估指標(biāo)。前者主要有進(jìn)入開臂次數(shù)(open arm entry，OE)、進(jìn)入開臂時(shí)間(openarm time，OT)、進(jìn)入閉臂次數(shù)(C|ose arnl entry，CE)、進(jìn)入閉臂時(shí)問(wèn)(closearm time，CT)、OE百分率、OT百分率。后者主要有向下探究次數(shù)(head dipping，HD)、閉臂內(nèi)后腿直立次數(shù)(rearing，RE)、伸展一注意行為次數(shù)(stretch—attend postures，SAP)。

3．統(tǒng)計(jì)方法：計(jì)數(shù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)、單因素方差分析(One．way ANOVA)，組間比較用LSD．t檢驗(yàn)及SNK-q檢驗(yàn)。以P<0．05為差異有統(tǒng)汁學(xué)意義。

討 論
有關(guān)攻擊行為的實(shí)驗(yàn)研究已有相應(yīng)的報(bào)道，但數(shù)據(jù)并不完全一致，這可能與大鼠種群、刺激強(qiáng)度和時(shí)間、給藥方式、檢驗(yàn)設(shè)備精密度等多種因素有關(guān)。本研究通過(guò)強(qiáng)迫游泳復(fù)制經(jīng)典應(yīng)激模型，繼而通過(guò)催產(chǎn)素(OXT)進(jìn)行干預(yù)，從而誘導(dǎo)應(yīng)激后的異常母性攻擊行為(MA)趨于正�；�或減輕其應(yīng)激癥狀進(jìn)而促進(jìn)其MA的發(fā)展。

在MA實(shí)驗(yàn)中，觀察發(fā)現(xiàn)，生理鹽水對(duì)照組在撕咬次數(shù)、攀壓次數(shù)、總攻擊次數(shù)、攻擊潛伏期均有不同程度下降，這說(shuō)明應(yīng)激會(huì)破壞母鼠還擊入侵鼠的能力(在實(shí)驗(yàn)中可見，入侵者在踩壓仔鼠時(shí)母鼠反應(yīng)遲鈍)，符合之前的文獻(xiàn)報(bào)道；而給予不同劑量的OXT后，應(yīng)激狀況不同程度改善，這也與已有的報(bào)道一致。但是至于是攻擊總數(shù)增多為主還是撕咬次數(shù)增多為主，目前尚無(wú)定論，亦有追逐次數(shù)增多為主的報(bào)道，這說(shuō)明衡量攻擊行為的質(zhì)量缺乏一定的標(biāo)準(zhǔn)。此外，生理鹽水組在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可見食崽發(fā)生，從而直接導(dǎo)致了鼠崽數(shù)量的急劇下降，進(jìn)而影響了母鼠的嗅覺反應(yīng)和警覺反應(yīng)，使得護(hù)仔能力大大降低，而干預(yù)組卻可以有效地降低食崽性，這是以前的報(bào)道提及甚少的，這或許與OXT的社會(huì)關(guān)系(增強(qiáng)彼此信任親密關(guān)系)作用有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，在撕咬次數(shù)、攻擊持續(xù)時(shí)間、攻擊潛伏期方面，A、B、C組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明OXT對(duì)于應(yīng)激后的MA保護(hù)作用可能具有一定的劑量依從性；至于OXT劑量是否可以繼續(xù)增加，需要考慮毒理學(xué)意義(OXT副作用主要為血壓升高、脈搏加快、水潴留等)，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)在嚙齒類動(dòng)物研究中也提及甚少。事實(shí)上，在MA中也伴隨著母愛行為的發(fā)生，從而保證了幼崽的存活率以及物種的延續(xù)性。

憑借EPM發(fā)現(xiàn)，D組OT百分率和OE百分率明顯小于A組，進(jìn)入閉臂時(shí)間(CT)也明顯延長(zhǎng)，說(shuō)明OXT可能有增加應(yīng)激鼠進(jìn)入開臂的作用。而通過(guò)OXT進(jìn)一步注射(尤其是B組)發(fā)現(xiàn)，OT、OE、OT百分率、OE百分率明顯提高，說(shuō)明OXT具有一定的抗焦慮抗應(yīng)激效應(yīng)和劑量依從性，這也可能與MA和強(qiáng)迫游泳雙重應(yīng)激中OXT誘發(fā)的氨基酸(如GABA和谷氨酸)釋放增加或者是抑制了促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(CRF)以及相應(yīng)受體2(CRFR．2)的結(jié)合而發(fā)揮上述作用的，而后者被視為OXT發(fā)揮抗焦慮和不斷適應(yīng)應(yīng)激環(huán)境的重要因素之一。此外，也有文獻(xiàn)報(bào)道，垂體后葉素(AVP)、雌激素受體和睪酮、5．HT、多巴胺等激素蛋白以及相應(yīng)的大腦核團(tuán)(如伏隔核、海馬)也可能參與OXT的抗應(yīng)激生理作用。相對(duì)比B、c組而言，A組的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的提高程度雖小，但仍具有差異，這可能與OXT在血漿中的半衰期較短有關(guān)(大約3～10rain)。除此之外，根據(jù)Alica等人。制定的EPM使用規(guī)范，EPM還可檢測(cè)和評(píng)估與探索．危險(xiǎn)有關(guān)的指標(biāo)即HD、RE、SAP的次數(shù)，以此更全面地反映大鼠在開臂、閉臂、中央?yún)^(qū)的活動(dòng)性、應(yīng)對(duì)危險(xiǎn)(如本實(shí)驗(yàn)中的MA)以及應(yīng)激程度，這已在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中得到證實(shí)。D組HD、RE、SAP數(shù)量明顯少于c組，HD較A組也明顯減少，RE、SAP與B組差異顯著，說(shuō)明應(yīng)激大鼠的焦慮應(yīng)激程度不僅與開臂區(qū)m-JI盲q次數(shù)比例有關(guān)，而且還與探索、應(yīng)對(duì)危險(xiǎn)行為之間存在著相關(guān)性，這在MA中得到了很好的體現(xiàn)。

總之，強(qiáng)迫游泳所引起的應(yīng)激反應(yīng)會(huì)破壞分娩后母鼠的母性行為的固有組分，即母愛行為(如建穴、叼仔、舔仔、梳理毛發(fā)、n甫乳等行為表現(xiàn))和MA，并且對(duì)于MA的行為改變或生理心理沖擊(引發(fā)焦慮、抑郁、潰瘍性出血等)更大，這與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道相一致。通過(guò)給予不同劑量的OXT可以對(duì)上述行為起到有效的干預(yù)或行為補(bǔ)償作用，而OXT對(duì)于MA的保護(hù)作用機(jī)制目前尚不明確，有待于進(jìn)一步從分子學(xué)、基因?qū)W、心理學(xué)等方面著手探究。實(shí)驗(yàn)中的確發(fā)現(xiàn)母子親密性提高，這可能是OXT治療的前景，可以保證種群的生存率。所以設(shè)想是否可以給那些母子關(guān)系不和諧的其他物種以至于人類一定的OXT，還需大量基礎(chǔ)和臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)確定。