囊泡/外泌體天然存在于體液中,并穩(wěn)定攜帶了一些重要的信號分子。囊泡/外泌體相關(guān)功能的研究已經(jīng)成為研究熱點(diǎn),并有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。
通常,因流式細(xì)胞儀無法檢測低于 250nm 的顆粒,因而并不是檢測囊泡/外泌體微顆粒的最佳選擇。而貝克曼庫爾特公司的 CytoFLEX 流式細(xì)胞儀的問世,為流式檢測囊泡/外泌體微顆粒開辟了蹊徑。
CytoFLEX是第一臺可檢測100 nm微顆粒的流式細(xì)胞儀,并具有可同時(shí)檢測13色熒光、單個(gè)樣本存儲量大等優(yōu)秀性能,為微顆粒的檢測提供了理想的檢測平臺。
材料與方法
1.試劑
2.樣本制備
數(shù)據(jù)分析
1.建立FSC / VSSC散點(diǎn)圖,檢測Megamix-Plus FSC beads(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm),調(diào)整gain值。圈定100 nm - 900nm微顆粒分布區(qū)域,設(shè)定門MP Gate。同樣電壓條件下,樣本檢測管分布于MP Gate門內(nèi)的即為囊泡/外泌體微顆粒;
2.建立AnnexinV-FITC/APC雙參數(shù)散點(diǎn)圖,通過AnnexinV表達(dá)量的多少,區(qū)分不同類型的微顆粒。并建立CD63-PE/CD41-PC7雙參數(shù)的散點(diǎn)圖,來檢測不同類型的囊泡/外泌體微顆粒,細(xì)胞表面抗原的不同。
*實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)由Kaluza軟件分析
結(jié)果
1. Megamix-Plus FSC beads 檢測結(jié)果
根據(jù)微球(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm)的分布,界定微顆粒的位置,將門命名為”MP Gate”。
2. 囊泡/外泌體微顆粒檢測結(jié)果
圖A中MP Gate顯示囊泡/外泌體微顆粒;圖B和C為相應(yīng)熒光通道中,微顆粒的自發(fā)熒光;圖D中顯示兩群Annexin-V陽性細(xì)胞群標(biāo)記囊泡/外泌體微顆粒。Annexin-V dim在圖中用綠色顯示,該群微顆粒表達(dá)CD41不表達(dá)或低表達(dá)CD63,且細(xì)胞較。籄nnexin-V high在圖中用紅色顯示,該群微顆粒表達(dá)CD41+CD63+,且細(xì)胞相對較大。