人神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）ELISA試劑盒分析檢測(cè)說(shuō)明書

    本試劑盒僅供研究使用。

    檢測(cè)范圍：48T25ng/L-800ng/L

    使用目的：

    本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）含量。

    實(shí)驗(yàn)原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）水平。用純化的人神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF），再與HRP標(biāo)記的神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）濃度。

    試劑盒組成

    1.30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶；2.酶標(biāo)試劑6ml×1瓶

    3.酶標(biāo)包被板12孔×8條；4.樣品稀釋液6ml×1瓶

    5.顯色劑A液6ml×1瓶；.6顯色劑B液6ml×1/瓶

    7.終止液6ml×1瓶；8.標(biāo)準(zhǔn)品（48ng/ml）0.5ml×1瓶

    9.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶；10.說(shuō)明書1份

    11.封板膜2張；12.密封袋1個(gè)

    150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

    2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

    6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

    7.溫育：操作同3。

    8.洗滌：操作同5。

    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

    10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

    11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

    ELISA試劑盒的優(yōu)勢(shì)：

    全面——混合8種不同的常見抗原，對(duì)自身免疫性疾病進(jìn)行全面篩查。

    快速——檢測(cè)時(shí)間短（~2小時(shí)），確診時(shí)間更早。

    準(zhǔn)確——ELISA檢測(cè)方法，靈敏度高，特異性強(qiáng)，適用性好。

    質(zhì)優(yōu)——美國(guó)技術(shù)開發(fā)，高品質(zhì)及高可靠性的分析性能。

    價(jià)低——國(guó)內(nèi)自生產(chǎn)，符合國(guó)內(nèi)實(shí)情，降低生產(chǎn)成本。

    Elisa試劑盒組織結(jié)構(gòu)：

    1、血清：操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

    2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

    3、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

    5、保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    注意事項(xiàng)：

    1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

    3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

    4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

    5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6．底物請(qǐng)避光保存。

    7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

    8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

    10.如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：；2-8℃。

    2．有效期：6個(gè)月