隨著光吸收法可以滿足越來越多的應用檢測領域，終點法讀板機在實驗室中的占有率也越來越高。例如ELISAs方法進行細胞因子定量和Bradford法進行蛋白定量。本篇應用就是要著重比較使用Bradford法進行蛋白定量檢測時，Molecular Devices公司最新的產品EMax® Plus微孔板讀板機和VMax微孔板讀板機的性能。此外，我們比較了EmaxPlus微孔板讀板機和Emax終點法微孔板讀板機，利用雙抗夾心ELISA方法來定量小鼠/大鼠IL-22細胞因子時表現上的差異。

 

Bradford蛋白定量檢測法是一種基于酸性染料與蛋白結合的光吸收實驗1。當考馬斯亮藍染料與蛋白質結合后，其光吸收最大檢測波峰是從460nm轉移至595nm2。可以通過擬合標準曲線得出未知樣本的濃度。

使用伯樂公司的Bradford蛋白定量檢測試劑盒。以牛血清白蛋白標品來制作一條標準曲線，加入96孔板中且每個濃度下有三個復孔。將考馬斯亮藍G-250染料按1:4稀釋后加入到蛋白樣本中。孵育30分鐘后，分別在EMax Plus和VMax兩臺讀板機上檢測585nm波長下的吸光度。最后，應用SoftMax® Pro軟件扣除背景后并生成一條標準曲線(圖1)。通過比較發(fā)現兩臺讀板機上得出的R2結果都是0.98。曲線的線性部分也和試劑盒中對標準曲線的描述相同。

 

圖 1. 使用伯樂公司的Bradford蛋白定量檢測試劑盒中的牛血清白蛋白標準品制備一條標準曲線。 兩臺儀器獲得的結果比較幾乎相同。 實驗結果線性區(qū)間可達5個稀釋度，且R2結果均為0.98。

 

白介素22是一種和炎癥相關的細胞因子。它是白介素10細胞因子超家族和干擾素3家族的一員，在介導炎癥反應和組織修復過程中起到重要的作用。IL-22可表達在多種細胞中，如gut，skin，NK細胞and CD4+Th1細胞4。

使用R&D公司小鼠/大鼠IL-22雙抗夾心法E L I S A 檢測試劑盒進行定量，比較EMax Plus和EMax兩臺讀板機的檢測結果。首先，將一種能特異性結合小鼠/大鼠IL-22的多克隆抗體預先包被在一塊96孔板中。然后，使用移液器向微孔板中加入標準品、質控和空白對照進行孵育，推薦使用Molecular Devices公司的最新洗板機MultiWash.+進行洗板。隨后，包被有多抗的微孔板中加入小鼠/大鼠IL-22細胞因子進行孵育后再洗板。最后，短暫孵育后加入底物終止反應并在EMax Plus和EMax兩臺讀板機上進行讀數。顏色深淺與孵育時結合的小鼠／大鼠IL-22量成正比。應用SoftMax Pro軟件計算后生成標準曲線(圖2)。兩條標準曲線的R2值也很接近。

 

圖2. 使用R&D公司的小鼠/大鼠IL-22 ELISA定量檢測試劑盒，比較EMax Plus和EMax兩臺讀板機在光吸法檢測結果上的差異。標準曲線的制備及雙抗夾心ELISA實驗過程都使用了MultiWash+洗板機單列清洗模式。發(fā)現在兩臺讀板機上的ELISA檢測結果，即兩條標準曲線幾乎相同。

 

 

關于MultiWash+洗板機

MultiWash+是一臺全自動洗板機，兼容96孔和384孔板。并且標配有四個洗液瓶或沖洗瓶，外加一個廢液瓶，實現清洗的最大靈活性。儀器上配有觸摸屏并且預存20種不同的清洗模式，每種模式下均可靈活的設置8個循環(huán)步驟。另外，儀器還可調節(jié)洗液流速和體積，調節(jié)吸液的速度和時間及浸泡時間。同時，洗頭通過在每個孔中交叉吸液方式提高清洗效率，降低每孔中的殘液量，并提供三種震蕩方式方便用戶混勻洗液。儀器占地面積小，無需額外的真空和壓力裝置，內置泵的設計為您提供一個安靜的操作環(huán)境。