流式細(xì)胞儀光源的那點事
瀏覽次數(shù):5134 發(fā)布日期:2015-1-22
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激光是一種相干光源,它能提供單波長、高強度及穩(wěn)定性高的光照,是細(xì)胞微弱熒光快速分析的理想光源。細(xì)胞處在快速運動的狀態(tài),每個細(xì)胞經(jīng)過光照區(qū)的時間僅為微秒左右,每個細(xì)胞所攜帶熒光物質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生熒光信號的強弱與被照射的時間和激發(fā)光的強度有關(guān),只有細(xì)胞接受到足夠的光照,才能產(chǎn)生相應(yīng)可被檢出的信號。通常小型流式細(xì)胞儀的激光功率在20mW,而貝克曼的CytoFLEX采用的固體激光器最小功率為50mW,最大可達80mW。
應(yīng)用在流式細(xì)胞儀上的激光器可分為兩類:1.氣體激光器:利用氣體或蒸氣作為工作物質(zhì)產(chǎn)生激光的器件。與固體、液體比較,氣體的光學(xué)均勻性好,因此,氣體激光器的輸出光束具有較好的方向性、單色性和較高的頻率穩(wěn)定性。但氣體的密度小,不易得到高的激發(fā)粒子濃度,因此,氣體激光器輸出的能量密度一般比固體激光器小。2.固體激光器:用固體激光材料作為工作物質(zhì)的激光器,固體激光器可作大能量和高功率相干光源,目前大多數(shù)高端流式細(xì)胞儀采用此種激光器。
針對不同的熒光染料需要匹配不同顏色的激光,常用的有405nm的紫激光,488nm的藍(lán)激光,638nm的紅激光。其中488nm藍(lán)激光為最常用的激光,貝克曼CytoFLEX是唯一最多可配置3個激光器的小型流式。不要被多色分析所迷惑,只有配備了個數(shù)更多、功率更大的激光器的儀器才真正具備強大的性能。