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為你的植物選擇合適的培養(yǎng)基

瀏覽次數(shù):8667 發(fā)布日期:2014-9-12  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
植物組織培養(yǎng)基包括多種成分:無機(jī)鹽、維生素、氨基酸、生長調(diào)節(jié)劑、糖類、瓊脂(或結(jié)冷膠)和水。所有這些成分在植物組織培養(yǎng)中至少有1種或多種作用。
 
植物組織培養(yǎng)基中的礦質(zhì)元素進(jìn)入植物細(xì)胞后用于合成有機(jī)分子或作為酶反應(yīng)中的催化劑?扇苄喳}離子在植物電離分子運(yùn)輸中作為平衡離子,滲透壓的調(diào)節(jié)以及維持植物體電化學(xué)勢的平衡都起著重要的作用。
 
氮、硫和磷是蛋白質(zhì)和核酸的組成成分。鎂離子和許多的微量元素是許多酶和細(xì)胞器的基本組成部分,因此在多種反應(yīng)中起著重要的催化作用。鈣離子和硼酸主要存在植物的細(xì)胞壁中,尤其是鈣離子在維持生物膜穩(wěn)定性起著重要作用。相反,鉀離子和氯化物在滲透調(diào)節(jié)中起著重要作用,參與維持電化學(xué)勢的平衡,同時也是許多酶的活化劑。
 
下面對常用培養(yǎng)基做一個介紹:
MS培養(yǎng)基,最初是 Murashige 和 Skoog 于1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計的,經(jīng)過改良后,現(xiàn)今可以用于多種植物的組織培養(yǎng),如馬鈴薯、胡蘿卜、甘藍(lán)等,許多研究者根據(jù)不同的試驗需要,先后研發(fā)了改良MS培養(yǎng)基包括含1/2大量元素、含3/4大量元素、用NaNO3替代NH4NO3、不含NH4NO3、含1/2NH4NO3和KNO3的培養(yǎng)基等,一般需要根據(jù)具體的試驗材料和試驗?zāi)康倪x用具體的培養(yǎng)基。
 
N6培養(yǎng)基,被定義用來改善水稻花粉愈傷組織的形成、生長和分化。NH4+離子濃度的最適范圍是7.0 mM(或3.5mM(NH4)2SO4))。高濃度的銨鹽會顯著抑制水稻花粉的生長和分化。KNO3和培養(yǎng)基中其他成分的濃度不會影響花粉的生長。
 
B5培養(yǎng)基是1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計的,雙子葉植物在B5培養(yǎng)基上生長更適宜。B5(Gamborg)培養(yǎng)基的主要特點是含有較低的銨,這是因為銨可能對不少培養(yǎng)物的生長有抑制作用。
 
NB培養(yǎng)基,為N6培養(yǎng)基大量元素和B5培養(yǎng)基的微量元素和維生素混合物。
 
木本植物培養(yǎng)基也叫WPM培養(yǎng)基,是1981年由Lloyd和 McCown為山月桂莖尖培養(yǎng)專業(yè)設(shè)計,根據(jù)MS培養(yǎng)基改良而來,相對MS培養(yǎng)基而言,使用了硫酸鉀替換了硝酸鉀,硝酸銨的含量也降低到了MS培養(yǎng)基的1/4,氮鹽也主要以硝酸鈣的形式供應(yīng),現(xiàn)主要用于木本植物的組織培養(yǎng)。
                                                                                                                                                                
1、調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液(一般剛配好的培養(yǎng)基都是偏酸),逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中,邊滴邊攪拌,并隨時用精密的pH試紙(5.4~7.0)測培養(yǎng)基的pH,一直到培養(yǎng)基的pH為5.8為止(培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制在5.8)。在這里要注意的是,許多同學(xué)在做培養(yǎng)基時明明PH值調(diào)到了5.8但是還是不凝固,這個原因可能是:
a. 先檢查培養(yǎng)基組分中瓊脂的用量和質(zhì)量 
b. 如果瓊脂沒有問題,滅菌時間過長,一般在0.15MPa超過1小時后易凝固不良。 
c. 如果以上都正常,我們還要考慮稱量工具是否準(zhǔn)確,有些小市場買的稱量工具不是很準(zhǔn)確,建議稱量工具到正規(guī)廠家或?qū)I(yè)商店購買。
 
2、培養(yǎng)基的分裝溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上,因為粘在瓶口容易污染。
3、pH不要調(diào)過頭,以避免回調(diào)而影響內(nèi)各離子的濃度。
4、需不斷攪拌,以防瓊脂糊底燒焦。
5、嚴(yán)格按照配方配制。
來源:北京啟維益成科技有限公司試劑部
聯(lián)系電話:010-82743160,82743161,82743162
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