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PPM植物組培抗菌保護(hù)劑使用說明

瀏覽次數(shù):3770 發(fā)布日期:2014-7-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
產(chǎn)品名稱:PPMTM - Plant Preservative Mixture(植物組織培養(yǎng)抗菌保護(hù)劑)

貨號:PPM

保存條件:4º C

運輸條件:常溫

物理性質(zhì):溶液

性狀無色至琥珀色透明液體

pH3.8

有效期見瓶身標(biāo)簽說明

產(chǎn)品描述:

1.         PPMTM 是一種熱穩(wěn)定的抗菌劑,用于植物組織培養(yǎng)中植物的微生物污染防治與清除;

2.         在合理的使用劑量下,PPMTM是一種非常有效的植物組培抗菌劑與保護(hù)劑,不會對植物的生長(如種子萌發(fā),愈傷增殖、再生等)產(chǎn)生任何影響,可視為培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配方成份;

3.         PPMTM主要用于預(yù)防和消除來自空氣、水源或者人體接觸等外界因素導(dǎo)致的植物組培過程中的微生物污染,同時,對于植物內(nèi)生菌也同樣具有非常好的抑制效果;

4.         PPMTM廣泛適用于絕大多數(shù)被子植物和裸子植物,但是不推薦用于蕨類植物、藻類等水生植物;

5.         PPMTM具有熱穩(wěn)定性,能直接加入培養(yǎng)基高溫滅菌而不會影響使用效果,使用更加方便;

6.         PPMTM 相對于常規(guī)抗生素而言,性價比更高。

作用機(jī)理

PPMTM的活性成分能滲透細(xì)菌或者真菌細(xì)胞壁,抑制呼吸作用中三羧酸循環(huán)和電子傳遞鏈過程中關(guān)鍵酶的活性,同時,也能阻斷細(xì)菌和真菌吸收和利用培養(yǎng)基中單糖和氨基酸的過程,從而實現(xiàn)預(yù)防和清除植物組織培養(yǎng)過程中的微生物污染。

相對抗生素的優(yōu)勢:

1.         PPM TM能廣泛抑制和清除細(xì)菌和真菌的污染,并防止真菌孢子的萌發(fā);

2.         PPM TM是通過抑制多種酶的活性而達(dá)到抑菌效果,從而能避免耐藥突變體的發(fā)生;

3.         PPM TM具有熱穩(wěn)定性,無需過濾滅菌,能直接加入培養(yǎng)基高溫滅菌而不會影響使用效果,使用更加方便;

4.         PPM TM性價比更高,可更加廣泛的應(yīng)用于更多的科學(xué)研究、作物育種、組培苗工廠化生產(chǎn)中。

產(chǎn)品專利說明:

PPMTM - Plant Preservative Mixture是專利產(chǎn)品,其商品名稱,配方及使用方法等都受專利保護(hù),專利號5,750,402。

常規(guī)使用簡介:

以下使用指南是針對大多數(shù)情況下的常規(guī)使用說明,特殊情況可做適當(dāng)調(diào)整。

使用指南

污染預(yù)防

消毒滅菌

抑制農(nóng)桿菌

濃度 (v/v)

0.05 – 0.2%

5.0% (see note)

0.05%

處理時間

持續(xù)

4 – 12 hours

持續(xù)

說明

1. 具體使用濃度根據(jù)處理樣本有所不同;
2.原生質(zhì)體和愈傷組織處理濃度建議為0.05%;

1. 將組織加入到含5%PPM3X MS*鹽溶液中,攪拌4-12小時;
2. 處理過程中無需其他滅菌方法同時使用,不能添加酸堿試劑,調(diào)節(jié)pH,也不要加入Tween20等;

3.處理完成以后將組織轉(zhuǎn)移到含0.05%PPM的培養(yǎng)基中;

與其他抗生素配合使用效果更佳

*說明:MS溶液是泛指,如樣本的培養(yǎng)基鹽溶液不是MS鹽,以具體適用的培養(yǎng)基鹽溶液為準(zhǔn);

操作說明:

以下操作說明是針對大多數(shù)情況下的常規(guī)使用說明,必要時,可根據(jù)具體植物樣本情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,如需更多指導(dǎo)可聯(lián)系Dr. Assaf Guri at guri1@erols.com。

1.      常規(guī)用量:
一般推薦使用使用濃度為0.05%-0.2%1L培養(yǎng)基中加入0.5-0.75ml PPM™),愈傷增殖,器官形成,胚性組織發(fā)育等使用濃度為0.05%-0.075%

說明:
(a)
含有PPM™的培養(yǎng)基無需在超凈工作臺中分裝,在培養(yǎng)基凝固以后將培養(yǎng)瓶/皿蓋子蓋  

好即可。如使用自動灌裝系統(tǒng),建議在灌裝前后將分裝管用高壓滅菌熱水處理;
(b) 如果培養(yǎng)基儲存液保存在無菌容器中并未經(jīng)污染的情況下,加入PPM™配制的培養(yǎng)基

無需再次過濾或者高溫滅菌。如果是營養(yǎng)培養(yǎng)基,如含有200mg/L甚至更高濃度氨基酸或者蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基,建議過濾滅菌。

2.      植物內(nèi)生菌污染處理

(a) 種子:PPM™不推薦用于直接處理含有大量的細(xì)菌或真菌孢子的種子滅菌,對于種子離體萌發(fā),建議先采用傳統(tǒng)方法消毒,然后置于含2-3%PPM™的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中,輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20和調(diào)節(jié)pH,處理完成以后直接插入含有PPM™(草本植物0.05-0.1%,木本植物0.2%)的培養(yǎng)基里;

(b) 外植體:以1cm外植體為例,將外植體置于含4-5%PPM™的全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中,輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20和調(diào)節(jié)pH,處理完成以后直接插入含有PPM™(草本植物0.05-0.1%,木本植物0.2%)的培養(yǎng)基里;

(c) 對于塊莖,球莖和鱗狀物的觀賞植物樣本:將其整體放入消毒劑中攪拌消毒處理以后,用水沖洗干凈,將材料切成薄片,置于含4-5%PPM™全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)液中,輕輕攪拌4-12小時,此過程千萬不能添加Tween20和調(diào)節(jié)pH,處理完成以后無需沖洗直接插入含有0.1-0.2%PPM™的培養(yǎng)基里進(jìn)行培養(yǎng)。

 

3.      如果厚的外植體、污染嚴(yán)重的植株、種子等樣本經(jīng)過以上處理仍得不到理想效果,可嘗試以下操作:

(a) 將材料浸泡在水中持續(xù)攪拌處理(松軟組織攪拌1小時,硬實組織攪拌2小時);

(b) 將材料在含50%PPM™全培養(yǎng)基礎(chǔ)鹽溶液中攪拌處理5-10分鐘,此過程千萬不能添加Tween20和調(diào)節(jié)pH

(c) 無需沖洗,將處理過的材料直接加入到培養(yǎng)基中即可。對于真菌污染,可在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)濃度的PPM™。對于真菌細(xì)菌混合性污染,建議在培養(yǎng)的第一個月的培養(yǎng)基中加入0.05%-0.2%PPM™

4.      嚴(yán)重污染材料污染去除與搶救(重污染不超過一周):

(a) 將污染的材料至于流水中用軟刷刷洗,然后置于含50% PPM™的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘,對于細(xì)菌或者混合性污染,建議使用100% PPM™0.6g/L的檸檬酸無菌水溶液按11混合的低pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理;

(b) 處理后的材料無需清洗,直接插入含0.05%-0.25PPM™的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至少一個月以上,其中前10天需要弱光培養(yǎng);

對于一些真菌、孢子和細(xì)菌污染隱藏較深,PPM™無法接觸到的部位,建議在初步的清洗以后,將材料切開,然后再放入含50% PPM™的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘處理。

5.      農(nóng)桿菌的去除:

共培養(yǎng)以后,將樣本用無菌水清洗,然后將樣本浸沒在100% PPM™(補(bǔ)充4X的培養(yǎng)基鹽溶液)中處理2分鐘,取出后用無菌紙吸干后并置于常用抗性培養(yǎng)基中培養(yǎng),3周后,更換到只含有0.05%-0.075% PPM™(無常用抗生素)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

使用注意事項

1.      在所有PPM消毒處理外植體的過程中,盡量保證容器的體積足夠大,并使外植體材料所有面積與含PPM的處理溶液充分接觸,以保證消毒效果;

2.      如果外植體出現(xiàn)高度氧化現(xiàn)象,不要扔棄,大約50%的外植體在4-6周內(nèi)即可恢復(fù);

3.      50% PPM™ 的處理溶液可以重復(fù)使用但是不推薦,因為使用次數(shù)和效果受外植體的體積與接種密度的影響。將50% PPM™ 的處理溶液保存在4ºC 可適當(dāng)延長其活性,一般可使用不超過10次。如果必要,建議配制250% PPM™ 溶液,一份用于外植體消毒內(nèi)生菌污染,另一份用于消除“培養(yǎng)過程中”的輕度污染材料搶救,第二份溶液在每次處理過后需要用0.2mm濾器過濾;

4.      如果50% PPM™ 溶液處理效果不理想,可采用100% PPM™ 溶液進(jìn)行處理,處理方法相同,但使用次數(shù)不得超過10次。

安全說明:

1.      雖然PPM是無毒性的,但是在使用過程中還需盡量避免直接與人體皮膚等直接接觸,建議使用時佩戴手套,保持空間空氣流通,如不慎吸入,先馬上因大量純凈水后立即就醫(yī),如不慎入眼,立刻用大量水沖洗眼睛15分鐘,用肥皂清洗PPM™接觸過的皮膚部位;

PPM的培養(yǎng)基垃圾處理與常規(guī)培養(yǎng)基處理方法相同。

如有問題,可以隨時聯(lián)系Plant Cell Technology中國總代理——北京西美杰科技有限公司

來源:北京西美杰科技有限公司
聯(lián)系電話:4000-50-4006,010-88597838,021-63599871/72(上海分公司)
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