[摘要]目的:用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型,探討匹魯卡品合適的用量及用法。方法: Wistar 大鼠腹腔注射氯化鋰3mmol /kg , 24h 后,給予不同劑量的匹魯卡品腹腔注射。結(jié)果:40mg/ kg 組和30mg/ kg 一次注入組的持續(xù)性癲癇大發(fā)作(SE) 出現(xiàn)率和亡率均為100% , 慢性復(fù)發(fā)性癲癇(SRS) 模型成功率為0%; 30mg/kg 分3 次注入組SE 出現(xiàn)率為28% ,死亡率為10% ,SRS 成功率為18%;25 mg / kg 3 次注入組SE 出現(xiàn)率為10% ,死亡率為0% ,SRS 成功率為10%。結(jié)論: 用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型,魯卡品的用量應(yīng)為25～30mg/ kg ,分次注入法優(yōu)于單次注入法。

癲癇為一常見病,由于其發(fā)作沒有預(yù)見性,發(fā)作的程度也不能人為控制,從而給研究帶來困難,因此建立實(shí)驗(yàn)性動物癲癇模型, 對于探索癲癇的發(fā)生機(jī)制,篩選、評價(jià)抗癲癇藥物的作用,具有重要意義。

動物癲癇模型的制備有很多種方法, 文獻(xiàn)報(bào)道氯化鋰—匹魯卡品注射所致的大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE) , 時(shí)間達(dá)到1 h 并且存活者, 即為自發(fā)作性癲癇(SRS) 模型^{[1 ,2 ]} ,這種癲癇模型類似于成年人癲癇中最常見的類型, 即顳葉癲癇, 并且具有操作簡單、重復(fù)性好、受外界干擾小等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型,探討匹魯卡品的具體劑量及用法。

1 材料與方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)動物與分組 健康雌性Wistar 大鼠,體重210～260g , 購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物繁育中心,在室溫、自然光環(huán)境下給予充足的食物及水。按匹魯卡品注射劑量分為40mg / kg 一次注入組( 6只) 、40mg/ kg 分3 次注入組(4 只) 、30mg/ kg 一次注入組(5 只) 、30mg/ kg 分3 次注入組(50 只) 、25mg/ kg 分3 次注入組(10 只) 。

1. 2 癲癇模型的制備 所有大鼠均于實(shí)驗(yàn)前24h時(shí)腹腔注射氯化鋰3mmol / kg , (濃度為1. 5mol / L ) ^{[3 ]}。24h 后, 給予不同劑量的匹魯卡品腹腔注射(濃度為0. 1%) 。分次注入組每次注射時(shí)間相隔10min ^{[4 ]}。凡出現(xiàn)持續(xù)性癲癇發(fā)作(SE) , 并持續(xù)至1h 者, 給予安定10 mg/ kg 腹腔注射予以終止^{[2 ]}。

2 結(jié)果

2. 1 各劑量組不同表現(xiàn)統(tǒng)計(jì) 所有大鼠均于第一次注射匹魯卡品后5～10min 出現(xiàn)膽堿能周圍神經(jīng)刺激癥狀, 即豎毛、流涎、血淚癥, 并出現(xiàn)不同程度的以下表現(xiàn), 包括: 少動、盯視、嘴部自動癥、點(diǎn)頭、眨眼、濕狗樣晃動; 33 只大鼠出現(xiàn)瞬時(shí)性癲癇大發(fā)作: 表現(xiàn)為直立、前肢和頭部陣攣、摔倒, 瞬時(shí)性癲癇大發(fā)作開始于第一次注射30min 之后,每次持續(xù)30～45s , 之后每隔2～5min 再次發(fā)作; 30 只大鼠出現(xiàn)持續(xù)性癲癇大發(fā)作(1h) , 表現(xiàn)與瞬時(shí)性癲癇大發(fā)作相同; 20只大鼠在持續(xù)性癲癇大發(fā)作后1～2天死亡; 10只SE 發(fā)作后存活者, 均于20～60 天出現(xiàn)自發(fā)性癲癇發(fā)作, 表現(xiàn)為耳抖、咀嚼、盯視等動作,每次持續(xù)數(shù)秒至數(shù)十秒,見表1。

2. 2 癲癇模型成功組的比較 見表2

25mg/ kg3次注入組與30mg / kg 3 次注入組SRS 成功率統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(統(tǒng)計(jì)學(xué)方法為χ2 檢驗(yàn),χ2 = 0. 38) : P > 0. 05 , 即上述兩種方法無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

上述結(jié)果顯示, 用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型, 匹魯卡品的總量應(yīng)為25～30mg/ kg , 劑量為40mg/ kg 均可出現(xiàn)SE , 但死亡率極高;總量在30mg / kg 時(shí),一次注入時(shí)死亡率較高, 應(yīng)當(dāng)分次注入, 可根據(jù)鼠的不同表現(xiàn)酌情增減,以適應(yīng)不同的個(gè)體差異。

3 討論

用氯化鋰—匹魯卡品腹腔注射制備的Wistar大鼠癲癇模型具備Racine 所述5 級行為表現(xiàn)^{[5 ]} ,即: I 嘴和面部抽動; I I 頭部陣攣性運(yùn)動; I I I 前肢陣攣; IV 陣攣性直立; V 姿勢控制喪失(摔倒) 。其中I～ I I I 級行為代表復(fù)雜部分性發(fā)作, IV～ V 級行為代表了繼發(fā)全身性發(fā)作。此模型較好地模擬了人類癲癇發(fā)生、擴(kuò)布和形成的全過程,是唯一與臨床最常見的成年人癲癇病, 即顳葉癲癇的特征相一致的動物模型^{[6 ]} : 并且有操作容易、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn), 是癲癇發(fā)生、形成機(jī)理研究較理想的模型。

用氯化鋰—匹魯卡品制備Wistar 大鼠癲癇模型, 文獻(xiàn)報(bào)道匹魯卡品單次注入30mg/ kg , 可使70%大鼠發(fā)作SE , 但盡管SE 持續(xù)90min 時(shí)用安定終止,仍有45%死亡;匹魯卡品30mg/ kg 分次注射,發(fā)作SE 后死亡率降至10 %以下,并且低劑量重復(fù)注射后, SRS 的幾率大于大劑量單次注射的幾率^{[7 ]} ,因此,小劑量分次注射的方法優(yōu)于大劑量單次注射。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

與文獻(xiàn)報(bào)道相比較, 本實(shí)驗(yàn)的癲癇模型成功率低,而死亡率高,其可能原因?yàn)?本實(shí)驗(yàn)均為雌性鼠,而文獻(xiàn)多為雄性鼠^{[1 , 2 , 6 ]} , 不同性別鼠對匹魯卡品的易感性不同; 文獻(xiàn)報(bào)道膽堿能神經(jīng)元在大鼠出生后2 周開始發(fā)揮作用,4 周時(shí)乙酰轉(zhuǎn)移酶達(dá)成年大鼠的83% ,因此,大鼠對匹魯卡品產(chǎn)生癲癇的敏感性具有年齡依賴性^{[8 ]} ,鼠齡為3 周時(shí)死亡率最高,成年大鼠的死亡率又有所下降,本實(shí)驗(yàn)所采用者為成年鼠,但較文獻(xiàn)報(bào)道者略小(以上實(shí)驗(yàn)鼠體重為210～260g ,文獻(xiàn)多為250～300g) ,可能是原因之一; 阿托品可拮抗匹魯卡品致癇及對腦組織的損害作用, 本實(shí)驗(yàn)未予阿托品,也是原因之一。

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