和血益智方對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶和海馬的影響

瀏覽次數(shù)：1248　發(fā)布日期：2013-10-28　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

目的觀察和血益智方對(duì)VD大鼠行為學(xué)和形態(tài)學(xué)的影響。

方法動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組和模型組。VD模型制作成功后隨機(jī)分為和血益智方小劑量組和大劑量組、思爾明組、生理鹽水（NS）組。用穿梭箱和水迷宮檢測(cè)大鼠行為學(xué)并作海馬常規(guī)染色，光鏡觀察。和血益智方、思爾明均能縮短VD大鼠穿梭箱實(shí)驗(yàn)主動(dòng)逃避時(shí)間和遭受電擊時(shí)間，減少遭受電擊次數(shù)；能縮短VD大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)時(shí)定位航行潛伏期、游泳的路徑，增加大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)中穿越原目標(biāo)的次數(shù)。NS組海馬細(xì)胞體積變大、核變小、有核仁消失和核固縮；除假手術(shù)組正常外，其余各組海馬細(xì)胞層次有減少，但細(xì)胞排列比較密集、細(xì)胞形態(tài)尚可。

結(jié)論和血益智方可改善VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

〔關(guān)鍵詞〕血管性癡呆；MORRIS水迷宮；學(xué)習(xí)記憶；海馬

血管性癡呆（vascular dementia,VD）是老年人多發(fā)癡呆之一，系繼發(fā)于腦血管病變后的緩慢性、漸進(jìn)性智能障礙。它不僅給患者帶來(lái)軀體上的痛苦，也帶來(lái)精神上的巨大負(fù)擔(dān)。中醫(yī)學(xué)院名老中醫(yī)教授用和血益智方治療VD有較好的臨床療效。本實(shí)驗(yàn)從行為學(xué)和形態(tài)學(xué)方面研究了和血益智方抗大鼠VD的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料和方法

1.1動(dòng)物及分組

經(jīng)穿梭箱實(shí)驗(yàn)篩選的健康正常SD大鼠，體重220~250 g 10，雄性，隨機(jī)分為假手術(shù)組（10只）和模型組。將造模成功的VD大鼠40只隨機(jī)分為HXYZ組1（和血益智方小劑量）、HXYZ組2（和血益智方大劑量）、思爾明（Sermion）組、生理鹽水（NS）組，每組各10只。各組大鼠均常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2試劑及器材

Sermion、染發(fā)劑

和血益智方含當(dāng)歸、川芎、白芍、生地、黃芪、旱蓮草、女貞子、益智仁等。所有藥材一次性水煎濃縮為水煎液，用無(wú)菌玻璃瓶分裝、密封，經(jīng)Co60照射后 4℃ 保存。給藥前在40℃ 恒溫水溫箱中加熱備用。

Morris水迷宮、穿梭箱實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、電熱恒溫水溫箱。切片機(jī)、顯微鏡、顯微攝像系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1 模型制作及給藥

VD模型制作及術(shù)后處理按參考文獻(xiàn)[1]進(jìn)行，夾閉大鼠雙側(cè)的頸總動(dòng)脈5 min、后復(fù)灌1 h、連續(xù)3次、末次灌注后永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈造模型。假手術(shù)組僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，既不夾閉也不結(jié)扎雙側(cè)的頸總動(dòng)脈，其他與模型組相同。

動(dòng)物造模成功后，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后開(kāi)始給藥：HXYZ組1、假手術(shù)組大鼠給予125%

和血益智方水煎劑，Sermion組給予0.5 mg/100g思爾明混懸液、NS組給予生理鹽水，以上各組均按1 mL/100g灌胃；HXYZ組2用125% 2 mL/100g和血益智方灌胃；各組動(dòng)物均用藥30d。

1.3.2行為學(xué)檢測(cè)

從用藥第26天起，分別進(jìn)行大鼠穿梭箱實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。

1.3.2.11

穿梭箱實(shí)驗(yàn) 大鼠穿梭箱實(shí)驗(yàn)每日1次，連續(xù)5 d ，共5次；每次穿梭箱實(shí)驗(yàn)于當(dāng)天晚6時(shí)進(jìn)行，方法參考文獻(xiàn)[1]。

1.3.2.2水迷宮實(shí)驗(yàn)

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)每天2次，連續(xù)5d，內(nèi)容包括學(xué)習(xí)訓(xùn)練、定位航行（游泳時(shí)間設(shè)定為120s）、空間探索實(shí)驗(yàn)（游泳時(shí)間設(shè)定為30 s），具體操作方法同參考文獻(xiàn)[1]。水迷宮實(shí)驗(yàn)于每天白天進(jìn)行。每次大鼠穿梭箱實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)各組別順序相同。

1.3.3病理學(xué)觀察

行為學(xué)檢測(cè)完畢，立即斷頭處死大鼠，取左側(cè)海馬甲醛固定，然后作HE常規(guī)染色，光鏡觀察。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

各組穿梭箱實(shí)驗(yàn)電擊次數(shù)、電擊時(shí)間、主動(dòng)回避時(shí)間和水迷宮實(shí)驗(yàn)潛伏期、穿越目標(biāo)次數(shù)、路徑等指標(biāo)用SPSS 10.0軟件進(jìn)行AVON（單因素方差分析）檢驗(yàn)。根據(jù)方差齊與否，再選擇相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)分析方法。

2結(jié)果

2.1行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1穿梭箱實(shí)驗(yàn)

和血益智方能明顯縮短VD大鼠主動(dòng)逃避時(shí)間和遭受電擊時(shí)間，減少遭受電擊次數(shù)，與NS組比較有顯著性差異（P< 0.05）。但作用不如Sermion組。

2.1.2水迷宮實(shí)驗(yàn)

經(jīng)過(guò)和血益智方治療30 d后，藥物組比NS組動(dòng)物定位航行潛伏期縮短，游泳的路徑也縮短；在空間探索實(shí)驗(yàn)中，30s內(nèi)大鼠穿越原目標(biāo)的次數(shù)增加。上述指標(biāo)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析均有顯著性差異。它們的游泳軌跡如圖1~5 。

2.2病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果

光鏡下觀察：假手術(shù)組海馬CA1區(qū)、CA2區(qū)、CA3區(qū)、CA4 區(qū)以及齒狀回等各區(qū)的分子層、錐體細(xì)胞層（顆粒細(xì)胞層）、多形細(xì)胞層之細(xì)胞排列緊密有序，顆粒細(xì)胞大小一致，核圓而大，邊界及核仁可見(jiàn)，神經(jīng)纖維排列整齊；NS組海馬CA1區(qū)細(xì)胞大小不規(guī)則，錐體細(xì)胞層層次減少，排列稀疏，細(xì)胞體積變大，有數(shù)量不等的小空泡，細(xì)胞核變

小，結(jié)構(gòu)不清，核仁消失，核固縮為三角形或多角形，神經(jīng)纖維排列紊亂，神經(jīng)元脫失現(xiàn)象明顯。其它各組海馬顆粒細(xì)胞層次有減少，但層數(shù)較模型組多，細(xì)胞排列比較密集、整齊有序，細(xì)胞缺失存在，核圓而大，邊界及核仁尚清楚，胞漿內(nèi)成分減少，神經(jīng)纖維排列不太整齊。組織病理切片提示模型組神經(jīng)元有損傷，用藥物治療后神經(jīng)元損傷有所減輕。海馬組織（HE染色，400倍）的病理切片如圖6~10。

3 討論

VD是繼發(fā)腦血管病變的中樞神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能損害，導(dǎo)致患者認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶、理解等能力下降。不同類型的記憶有不同的神經(jīng)結(jié)構(gòu)和回路參與，這些神經(jīng)結(jié)構(gòu)的血流減少或中斷，就會(huì)引起功能障礙，如不及時(shí)恢復(fù)血流，神經(jīng)細(xì)胞就會(huì)腫脹、死亡[2]。因此，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)VD的治療[3] 包括：①治療原發(fā)腦血管��；②改善腦功能。所用的藥物如思爾明為二氫**堿類藥，有α受體阻斷作用，能擴(kuò)張顱內(nèi)腦血管，改善腦血流，有比較明顯的抗VD效果。 [4-6]

VD的證候與中醫(yī)的“呆病”、“文癡”、“健忘”、“善忘”等相當(dāng)，教授從臨床實(shí)踐觀察認(rèn)為VD以氣血虧虛、肝腎不足者居多，兼有痰瘀互病者亦不少見(jiàn)，治宜調(diào)和氣血、滋補(bǔ)肝腎。方中當(dāng)歸辛溫，血虛能補(bǔ)、血瘀能散，使氣血調(diào)和、各有所歸；川芎辛溫，活血解郁、行血中之氣；白芍微溫，和營(yíng)滋陰，與當(dāng)歸、地黃同用為滋陰養(yǎng)血之良藥；生地甘寒養(yǎng)陰，與歸芍同用有補(bǔ)血生血之功；黃芪炙之則溫，大補(bǔ)元?dú)�，填空補(bǔ)虛（髓），為補(bǔ)氣藥之長(zhǎng)，與四物湯同用，起益氣養(yǎng)血之用；旱蓮草、女貞子甘寒補(bǔ)血，滋肝腎之陰；益智仁補(bǔ)腎益智；法夏則辛燥，降氣化濁，對(duì)本方中補(bǔ)氣養(yǎng)血藥起補(bǔ)而不滯，潤(rùn)而不膩的作用，故和血益智方能調(diào)和氣血、滋補(bǔ)肝腎，填精生髓。

中藥藥理學(xué)研究表明川芎有擴(kuò)張腦血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集的作用；黃芪、當(dāng)歸有促進(jìn)骨髓造血、擴(kuò)張血管的作用，當(dāng)歸還有穩(wěn)定細(xì)胞膜作用；生地能增加“陰虛”動(dòng)物模型腦內(nèi)M-膽堿受體的結(jié)合位點(diǎn)，并且可促進(jìn)“血虛”動(dòng)物紅細(xì)胞、血色素的恢復(fù)，有顯著的“生血”作用；白芍有抗血小板聚集作用。黃芪對(duì)雙側(cè)頸動(dòng)脈結(jié)扎所致的動(dòng)物腦缺氧有顯著對(duì)抗作用，可增加小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。和血益智方抗VD的確切機(jī)制與生物活性成分有待進(jìn)一步研究。

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