動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)

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動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(experimental animals)是指經(jīng)過(guò)人工飼養(yǎng)、繁育，對(duì)其攜帶的微生物及寄生蟲實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來(lái)源清楚，應(yīng)用于科研、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。這些個(gè)體具有較好的遺傳均一性、對(duì)外來(lái)刺激的敏感性和實(shí)驗(yàn)再現(xiàn)性。
一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種類和特點(diǎn)
（一）狗(dog) 屬于哺乳綱、食肉目、犬科動(dòng)物。其嗅覺(jué)、視和聽覺(jué)均很靈敏，對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力強(qiáng)。消化、循環(huán)和神經(jīng)系統(tǒng)均發(fā)達(dá)，且與人類很相似。適用于各類實(shí)驗(yàn)外科手術(shù)學(xué)的教學(xué)和臨床科研工作，是復(fù)制休克、DIC、動(dòng)脈粥樣硬化等動(dòng)物模型首選的動(dòng)物之一，由于其價(jià)格較昂貴，教學(xué)實(shí)驗(yàn)中不如某些中小動(dòng)物常用。
（二）家兔(rabbit) 屬于哺乳綱、嚙齒目、兔科、草食類動(dòng)物。品種有：青紫藍(lán)兔（livor blue rabbit）、中國(guó)白兔（china white rabbit）、新西蘭白兔和大耳白兔（maximus ear white rabbit）等。具有性情溫順，對(duì)溫度適應(yīng)敏銳和便于靜脈注射等特點(diǎn)，是教學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的動(dòng)物之一。可用于血壓、呼吸、泌尿等多種實(shí)驗(yàn)，還可用于體溫實(shí)驗(yàn)和熱原的研究與鑒定。
（三）大白鼠(rat) 屬哺乳綱、嚙齒目、鼠科類動(dòng)物。其性情兇猛、喜歡啃咬、繁殖周期短、抗病能力較強(qiáng)、心血管反應(yīng)敏銳。用于水腫、休克、炎癥、心功能不全、腎功能不全和應(yīng)激反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)。大鼠不能嘔吐，故不能做催吐實(shí)驗(yàn)。
（四）小白鼠(mouse) 屬哺乳綱、嚙齒目、鼠科類動(dòng)物。具有繁殖周期短、產(chǎn)仔多、生長(zhǎng)快、體型小、溫順易捉、易于飼養(yǎng)等特點(diǎn)。廣泛應(yīng)用于各種藥物的毒理實(shí)驗(yàn)、藥物篩選實(shí)驗(yàn)、生物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，以及癌癥研究、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、遺傳學(xué)、免疫性疾病研究等項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。
（五）豚鼠(cavy) 屬哺乳綱、嚙齒目、豚鼠科類動(dòng)物。又名天絲鼠、荷蘭豬。其性情溫順，嗅覺(jué)和聽覺(jué)較發(fā)達(dá)。對(duì)某些病毒反應(yīng)敏銳，易引起變態(tài)反應(yīng)。適用于藥理學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、各種傳染病的實(shí)驗(yàn)研究。細(xì)菌、病毒診斷學(xué)研究、過(guò)敏、變態(tài)反應(yīng)性實(shí)驗(yàn)研究和內(nèi)耳及聽神經(jīng)疾病研究。也常用于離體心臟實(shí)驗(yàn)研究。
（六）蛙和蟾蜍(frog and toad ) 均屬兩棲綱、無(wú)尾目類動(dòng)物。常用于教學(xué)實(shí)驗(yàn)。其心臟在離體后仍可有節(jié)律地跳動(dòng)。常用于心臟生理、藥理和病生實(shí)驗(yàn)。蛙舌與腸系膜是觀察炎癥和微循環(huán)變化的良好標(biāo)本。此外，蛙類還可用于水腫和腎功能不全的實(shí)驗(yàn)研究。
二、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的品系
（一）按遺傳學(xué)控制分類
1．近交系既純系動(dòng)物(I line animals)
經(jīng)連續(xù)20代（或以上）的全同胞兄妹交配，（或者親代與子代交配）而培養(yǎng)出來(lái)的遺傳基因純化的品系。品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先。由于此種交配較為方便而多被采用。Mouse、rat等一些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的近交系的育成極大地促進(jìn)了生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的發(fā)展，尤其對(duì)于腫瘤研究的進(jìn)展起到了更為重要的作用。人們?cè)?xí)慣用“純種”稱呼近交系。
2．封閉群動(dòng)物(blocking nest animals)
以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群，在不從外部引入新個(gè)體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，稱為一個(gè)封閉群，或叫遠(yuǎn)交群。常見的blocking nest animals有：NIH mouse、Wistar rat、Hartley cavy和新西蘭白兔等。Blocking nest animals具有較強(qiáng)的繁殖力和生命力，對(duì)疾病抵抗力強(qiáng)，壽命長(zhǎng)，生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。因而廣泛應(yīng)用于教學(xué)與科研實(shí)驗(yàn)中。
3．雜交一代動(dòng)物(cross uni-generation animals)
兩個(gè)不同近交系雜交所產(chǎn)生的第一代動(dòng)物稱為cross uni-generation animals或F1代。它既有近交系動(dòng)物（inbred line Animals）的特點(diǎn)，又具有雜交的優(yōu)勢(shì)。Cross uni-generation animals生命力旺盛，繁殖率高，生長(zhǎng)快、體質(zhì)健壯，抗病力強(qiáng)。它與inbred line animals有同樣的實(shí)驗(yàn)效果。又稱為系統(tǒng)雜交性動(dòng)物（system crossability animals）。
4．突變品系動(dòng)物(mutational strain animals)
育種過(guò)程中，出于單個(gè)基因的突變，或?qū)⒛硞€(gè)基因?qū)耄?或通過(guò)多次回交“留種”，而建立一個(gè)同類突變品系（mutational strain）。此類個(gè)體具有同樣遺傳缺陷或病態(tài)。如肥胖癥、侏儒癥、肌萎縮、白內(nèi)障、視網(wǎng)膜退化、無(wú)毛等等，現(xiàn)己培養(yǎng)成的自然具有某些病的mutational strain有：白血病鼠、糖尿病鼠、腫瘤鼠、貧血鼠、高血壓鼠和裸鼠(無(wú)胸腺無(wú)毛)等等，這些品系的動(dòng)物對(duì)于研究相應(yīng)疾病的防治具有很重要的價(jià)值。
5．非純系動(dòng)物(no-sheer series)
一般是指任意交配繁殖的雜種動(dòng)物。此類動(dòng)物具有生命力旺盛、適應(yīng)性強(qiáng)、繁殖率高、生長(zhǎng)快、易于飼養(yǎng)管理等優(yōu)點(diǎn)。其缺點(diǎn)是個(gè)體差異大、反應(yīng)性不規(guī)則、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性差。由于其中包含有最敏感的與最不敏感的兩種極端的個(gè)體，因此適用于篩選性實(shí)驗(yàn)。雜種動(dòng)物比較經(jīng)濟(jì)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用。
（二）按微生物控制分類
根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所攜帶其它生命體的情況，目前我國(guó)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)等級(jí)，即一級(jí)：普通動(dòng)物；二級(jí)：清潔動(dòng)物；三級(jí)：無(wú)特定病原體動(dòng)物(SPF動(dòng)物)；四級(jí)：無(wú)菌動(dòng)物(GF動(dòng)物)和悉生動(dòng)物（GN動(dòng)物）。
1．普通動(dòng)物（common animals）：飼養(yǎng)在開放環(huán)境中，未經(jīng)積極的微生物控制，不攜帶人獸共患病和動(dòng)物烈性傳染病病原體的動(dòng)物。
2．清潔動(dòng)物（clearing animals）：是除一級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原體的動(dòng)物。
3．無(wú)特定病原體動(dòng)物(SPF動(dòng)物)
無(wú)特定病原體動(dòng)物簡(jiǎn)稱SPF動(dòng)物：是指除一、二級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
4．無(wú)菌動(dòng)物（GF）
是指體表、體內(nèi)任何部位均檢不出微生物、寄生蟲的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。此種動(dòng)物系在無(wú)菌條件下剖腹取出。在無(wú)菌、恒溫、恒濕的條件下飼養(yǎng)。食物與飲料全部無(wú)菌。
5．悉生動(dòng)物（GN）
是指在無(wú)菌動(dòng)物體內(nèi)，移入一種或幾種已知微生物后的動(dòng)物。
悉生動(dòng)物繁殖飼養(yǎng)條件復(fù)雜、價(jià)格昂貴，故不適用于教學(xué)，但對(duì)某些生物醫(yī)學(xué)研究具有重要的意義。
普通動(dòng)物和清潔動(dòng)物因價(jià)格較低，常常用于教學(xué)實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
一、種屬的選擇( genus excerpt)
根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，選擇相應(yīng)的種屬。不同種屬的動(dòng)物對(duì)于同一疾病的刺激是有不同的反應(yīng)程度的。例如在進(jìn)行過(guò)敏反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)首選豚鼠，而做發(fā)熱、熱原檢定、解熱藥的實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)選擇家兔、犬。家免、大白鼠常用于高血壓研究、小白鼠則宜進(jìn)行各類腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究�？傊�，在選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，應(yīng)盡可能選擇其結(jié)構(gòu)、功能和代謝特點(diǎn)接近于人類的動(dòng)物。
二、品系的選擇(strain excerpt)
同一種動(dòng)物的不同品系，對(duì)同一致病刺激物的反應(yīng)也不同。如津白II號(hào)小鼠容易致癌，而津白I號(hào)小鼠就不易致癌。
三、個(gè)體的選擇(individual excerpt)
同一品系的動(dòng)物，對(duì)同一致病刺激物的反應(yīng)也存在著個(gè)體差異，而這種個(gè)體差異往往與動(dòng)物的年齡(age)、性別(sex)、生理狀態(tài)(physiological condition)和健康情況(health condition)有關(guān)。
l. Age 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇適齡的動(dòng)物。一般幼年動(dòng)物較成年動(dòng)物敏感，急性實(shí)驗(yàn)選用成年動(dòng)物，慢性實(shí)驗(yàn)最好選用年輕一些的動(dòng)物，減少同一批動(dòng)物的年齡差別，可以增加實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性。
2. Sex 不同性別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)同一致病因素的反應(yīng)也不同。在實(shí)驗(yàn)研究中，應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)來(lái)選擇動(dòng)物的性別。如對(duì)動(dòng)物性別無(wú)特殊要求，也應(yīng)在各組中選用雌雄各半。
3. Physiological condition 在選擇個(gè)體時(shí)，應(yīng)考慮動(dòng)物的特殊生理狀態(tài)。一般妊娠、哺乳期的動(dòng)物不應(yīng)選擇。
4. Health condition 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康狀態(tài)，是實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癯晒Φ幕颈Ｕ�。�?shí)驗(yàn)證明，動(dòng)物處于衰弱、饑餓、寒冷、炎熱、疾病等情況下，實(shí)驗(yàn)結(jié)果很不穩(wěn)定。所以，健康狀況不好的動(dòng)物，不能用來(lái)作實(shí)驗(yàn)。
判斷動(dòng)物是否健康，應(yīng)掌握以下原則：
1.一般狀態(tài)發(fā)育良好，反應(yīng)靈活，食欲好，眼睛有神，不打噴嚏，鼻粘膜無(wú)分泌物等。
2．皮毛顏色動(dòng)物皮毛要光潔柔軟，無(wú)脫毛、蓬亂和真菌感染的現(xiàn)象。
3．腹部呼吸動(dòng)物腹部呼吸均勻，無(wú)膨大隆起的現(xiàn)象，肛門無(wú)稀便無(wú)分泌物。
4．爪趾特征動(dòng)物無(wú)咬傷、潰瘍、結(jié)痂等情況

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